| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥1020 |
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型號(hào)
-
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其他品牌 -
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經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 1020元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-29 11:25:14瀏覽次數(shù)：304
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總蛋白酶活性試劑盒,微板法
總蛋白酶活性試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 總蛋白酶試劑盒說明書 (貨號(hào)：WS3121W 微板法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 蛋白酶活力通常利用天然底物和合成底物進(jìn)行測(cè)定。各種蛋白酶均可水解天然底物 酪蛋白因此由酪蛋白測(cè)得的活力是蛋白酶的總活力。 本試劑盒利用總蛋白酶催化水解偶氮酪蛋白，生成的產(chǎn)物于 366nm 有光吸收，通 過測(cè)定吸光值的變化得出總蛋白酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存條件 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部， 再加13mL的蒸餾水混勻備用。 試劑二 液體 12mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 36mL×1 瓶 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、天平、研缽、冰和蒸餾水。 四、總蛋白酶活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。4℃×12000rpm 離心 10min， 取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或 細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；4℃×12000rpm 離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 366nm。 ② 所有試劑解凍至室溫或于 25℃水浴鍋中孵育 20min。 ③ 在 EP 管中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 樣本 120 120 試劑一 120 試劑二 120 120 混勻，30℃孵育 60min 試劑三 360 360 試劑一 120 立即混勻，低溫（放冰上）靜置 5min；室溫 12000rpm 離心 5min，直接取 200μL 至 96 孔板中，于 366nm 處讀 值。ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照(每個(gè)樣本做一個(gè)自身對(duì)照)。 【注】：若ΔA 在零附近徘徊，可以延長(zhǎng) 30℃孵育時(shí)間 T（如延長(zhǎng)至 90min）或增加樣本取樣 質(zhì)量 W（如增至 0.2g），則改變后的反應(yīng)時(shí)間 T 和 W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本鮮重計(jì)算： 定義：每克組織每小時(shí)反應(yīng)體系中變化 1 個(gè)吸收單位定義為 1 個(gè)偶氮酪蛋白單位。 總蛋白酶(偶氮酪蛋白單位/h/g 鮮重)=ΔA÷1÷(W×V1÷V)÷T=8.3×ΔA÷W 2、按樣本蛋白濃度計(jì)算： 定義：每毫克組織蛋白每小時(shí)反應(yīng)體系中變化 1 個(gè)吸收單位定義為 1 個(gè)偶氮酪蛋白單位。 總蛋白酶(偶氮酪蛋白單位/h/mg prot)=ΔA÷1÷(V1×Cpr)÷T=8.3×ΔA÷Cpr 3、按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 定義：每 104個(gè)細(xì)菌/細(xì)胞每小時(shí)反應(yīng)體系中變化 1 個(gè)吸收單位為 1 個(gè)偶氮酪蛋白單位。 總蛋白酶(偶氮酪蛋白單位/h/104 cell)=ΔA÷1÷(500×V1÷V)÷T=0.02×ΔA÷Cpr 4、按照液體體積計(jì)算： 定義：每毫升液體每小時(shí)反應(yīng)體系中變化 1 個(gè)吸收單位定義為 1 個(gè)偶氮酪蛋白單位。 總蛋白酶(偶氮酪蛋白單位/h/mL)=ΔA÷1÷V1÷T=8.3×ΔA V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.12mL； W---樣本質(zhì)量，g； T---反應(yīng)時(shí)間，60min=1h； 500---細(xì)胞數(shù)量，萬(wàn)； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。
