| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥150 |
-
型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷(xiāo)商 -
所在地
上海市
| 96T | 150元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-28 15:14:58瀏覽次數(shù)：352
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尿素(Urea)/尿素氮含量(脲酶法),微板法
尿素(Urea)/尿素氮含量(脲酶法),微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 尿素（Urea）含量（酶法）檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS1021W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 尿素（Urea）又稱碳酰胺，舊稱尿素氮（BUN），是哺乳動(dòng)物和某些魚(yú)類(lèi)體內(nèi)蛋白質(zhì) 代謝分解的主要含氮產(chǎn)物，也是目前含氮量的氮肥。 該試劑盒利用尿素在脲酶的作用下水解產(chǎn)生氨離子和二氧化碳，氨離子在堿性介質(zhì)中 與酚顯色劑生成藍(lán)色物質(zhì)，該物質(zhì)的生成量與尿素含量成正比。通過(guò)于625nm處檢測(cè)該 有色物質(zhì)含量進(jìn)而得出尿素氮含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部，再加 1.1mL 的蒸餾水溶解備用。 試劑二 液體 3mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 試劑三 A×2 支 試劑三 B×1 支 4℃保存 臨用前向一支試劑三 A 中加入 46μL 的試劑三 B，混勻備用。 標(biāo)準(zhǔn)管 粉體 mg×2 支 4℃保存 每支臨用前加1mL蒸餾水溶解，即濃 度為6mg/mL的尿素，檢測(cè)前再用蒸餾 水稀釋200倍（5:995）即成0.03mg/mL （0.5mmol/L）的尿素。 三、所需儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、天平、移液器、離心機(jī)、蒸餾水。 四、尿素（Urea）含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 液體樣品：液體樣品：澄清的液體可直接檢測(cè)；若渾濁則離心后取上清液檢測(cè)。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 生 理鹽水，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；12000rpm 室溫離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，設(shè)置溫度在 37℃，設(shè)定波長(zhǎng)到 625nm。 ② 做實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本，找出適合本次檢測(cè)樣本的稀釋倍數(shù) D（如：尿液樣本可用 蒸餾水稀釋 100 倍）。 ③ 所有試劑解凍至室溫，在 96 孔板中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱 （μL） 測(cè)定管 空白管 （僅做一次） 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 樣本 20 蒸餾水 20 標(biāo)準(zhǔn)品 20 試劑一 10 10 10 蒸餾水 130 130 130 混勻，37℃避光反應(yīng) 15min 試劑二 20 20 20 試劑三 20 20 20 混勻，37℃避光反應(yīng) 20min，于 625nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測(cè)定-A 空白。 【注】：1.測(cè)定管的 A 值若超過(guò) 1.5，可把樣本用生理鹽水或蒸餾水進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尡稊?shù) D 代入計(jì) 算公式。 2.若△A 的差值在零附近徘徊，可增加樣本加樣量 V1（如增至 50μL，則蒸餾水相應(yīng)減少， 保持總體積不變；空白管和標(biāo)準(zhǔn)管維持不變），則改變后的 V1 需代入公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按液體體積計(jì)算： 尿素含量(mg/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))×103×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =30×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 尿素含量(mmol/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))÷60.04×103×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =0.5×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 2、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 尿素含量(ng/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))×106×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =60×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 尿素含量(nmol/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))÷60.04×106×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---尿素標(biāo)品濃度，0.03mg/mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； V1---加入樣本體積，0.02mL； V 標(biāo)---加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02mL； V---提取液體積，1mL； 60.04---尿素分子量； 500---細(xì)胞數(shù)量，萬(wàn)。
