| 上海宇淳生物科技有限公司
主營產品： PCR八聯排管,sigma現貨,Cy7試劑 |
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| 參考價 | ￥590-￥920 |
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型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質
經銷商 -
所在地
上海市
| 24T | 590元 | 1 盒 可售 |
| 48T | 920元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-27 10:09:08瀏覽次數：307
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肉桂酸4-羥基化酶(C4H)試劑盒
肉桂酸4-羥基化酶(C4H)試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 肉桂酸 4-羥基化酶（C4H）試劑盒說明書 （貨號：WS1001F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 肉桂酸-4-羥基化酶（C4H，EC 1.14.13.11）是苯丙烷類代謝途徑的關鍵酶。可有效調節 與之相應的黃酮類化合物等次生代謝產物的合成，其活性可作為植物抗性的一個生理指標。 本產品測試原理是以肉桂酸作為底物，在酶促反應的最適條件下，肉桂酸-4-羥基化酶催 化底物生成 4-羥基反式肉桂酸，其在 PH 值下，產物 4-羥基反式肉桂酸在 340nm 下有 吸收峰，進而計算出該酶活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 試劑規格 保存方式 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 2.5mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×2 瓶 -20℃保存 用前甩幾下使粉劑落入底部， 每瓶再加 10mL 蒸餾水溶解，用 不完的試劑分裝后-20℃保存， 禁止反復凍融，一周內用完。 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 2.5mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 液體 3mL×1 瓶 4℃保存 三、所需用的儀器與用品： 紫外分光光度計、1mL 石英比色皿（光徑 1cm）、臺式離心機、可調式移液器、研缽、 冰和蒸餾水。 四、肉桂酸 4-羥基化酶（C4H）活性檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 稱取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.5g），加入 1mL 提取液組織，進行冰浴勻 漿。12000rpm, 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 2、上機檢測： ① 紫外分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑（μL） 測定管 空白管（僅做一次） 樣本 100 試劑一 50 50 試劑二 350 350 試劑三 300 400 混勻，30℃水浴反應 30min 試劑四 50 50 混勻，靜置 2min 試劑五 60 60本試劑盒僅供科研使用 2 混勻后，取全部液體轉移至 1mL 石英比色皿中，于 340nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定-A 空白。 【注】若△A 的值在零附近徘徊，可增加樣本加樣量（如增加至 200μL，則試劑三相應減少） 或增加反應時間 T，則改變后的加樣體積 V1 和 T 需代入計算公式重新計算。 五、結果計算： 1. 按樣本鮮重計算： 酶活定義：每克組織每分鐘產生 1nmol 的 4-羥基反式肉桂酸為一個酶活力單位。 C4H（nmol/min/g 鮮重）=[(△A÷ε÷d×V2×109) ]÷(W×V1÷V)÷T =12.4×ΔA÷W 3. 按樣本蛋白濃度計算： 酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘產生 1nmol 的 4-羥基反式肉桂酸為一個酶活力單位。 C4H（nmol/min/mg prot）=[(△A÷ε÷d×V2×109) ]÷(V1×Cpr) ÷T =12.4×ΔA÷Cpr ε ---4-羥基反式肉桂酸在此反應條件下于 340nm 處的摩爾吸光系數，2.45×104 L/mol /cm； V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.1 mL； V2 ---反應體系總體積，910μL=9.1×10-4 L； d --光徑，1 cm； T---反應時間，30 min； W---樣本質量，g； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。
