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上海宇淳生物科技有限公司

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多功能氧化酶(MFO)試劑盒
多功能氧化酶(MFO)試劑盒
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48T560元1 盒 可售

更新時間:2024-05-24 15:26:57瀏覽次數(shù):359

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【簡單介紹】
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多功能氧化酶(MFO)試劑盒
多功能氧化酶 (MFO)是生物體內(nèi)重要的一種解毒酶,可使昆蟲適應(yīng)植物的變化;減弱或免受植物誘導(dǎo)抗性產(chǎn)生的有毒次生物質(zhì)對昆蟲的毒害。

多功能氧化酶(MFO)試劑盒

多功能氧化酶(MFO)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 多功能氧化酶 (MFO)活性測定說明書 (貨號:WS5190F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 多功能氧化酶 (MFO)是生物體內(nèi)重要的一種解毒酶,可使昆蟲適應(yīng)植物的變化;減弱或 免受植物誘導(dǎo)抗性產(chǎn)生的有毒次生物質(zhì)對昆蟲的毒害。 多功能氧化酶(MFO)催化對硝基苯甲醚產(chǎn)生對硝基*酚,該產(chǎn)物在 405nm 下有特征吸 收峰,通過檢測該物質(zhì)在 405nm 處的光吸收增加速率,進而得出 MFO 活性大小。 二、試劑盒的組成和配制: 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液 器、研缽、冰和蒸餾水。 四、多功能氧化酶 (MFO)活性檢測: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液,進行冰浴勻漿。 4℃×12000rpm 離心 10min取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取。 ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(104):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 2、上機檢測: ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 405nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 所有試劑解凍至室溫(25℃)。 ③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 提取液 60mL×1 4℃保存 試劑一 粉體 mg×2 4℃保存 每支用前甩幾下使試劑落入底部,分 別加入 1.4mL 乙醇,*全溶解后備 用,現(xiàn)配現(xiàn)用。 試劑二 液體 15mL×1 4℃保存 試劑三 粉體 mg×2 -20℃保存 臨用前甩幾下或離心使試劑落到底 ,每支加 2.7mL 蒸餾水溶解,用不 完的試劑分裝后-20保存,禁止反 復(fù)凍融,三天內(nèi)用完。 標準品 粉體 mg×1 4℃保存 若重新做標曲,則用到該試劑。 試劑名稱(μL測定管 樣本 250本試劑盒僅供科研使用 2 【注】:若ΔA 小于 0.005,可增加樣本量 V1(如增至 300μL,則試劑二相應(yīng)減少),或增加取樣質(zhì)量 W(如增至 0.2g),則改變后的樣本量 V1 和樣本質(zhì)量 W 需代入公式重新計算。 五、結(jié)果計算: 1、標準曲線方程:y = 3.8038x-0.0009PNP 摩爾濃度(μmoL/mL),y A2、按樣本鮮重計算: 酶活定義:每克組織每分鐘產(chǎn)生 1nmoL 的對硝基*酚(PNP)為 1 個酶活單位。 MFO(nmoL/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(W×V1÷V)÷T =8.8×(ΔA+0.0009)÷W 3、按樣本蛋白濃度計算: 酶活定義:每毫克組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmoL 的對硝基*酚(PNP)為一個酶活單位。 MFO(nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(V1×Cpr)÷T =8.8×(ΔA+0.0009)÷Cpr 4、按細胞數(shù)量計算: 酶活定義:每 104個細胞每分鐘產(chǎn)生 1nmoL 的對硝基*酚(PNP)為一個酶活單位。 MFO(nmoL/min/104cell)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷(500×V1÷V)÷T =0.018×(ΔA+0.0009) 5、按液體體積計算: 酶活定義:每毫升液體每分鐘產(chǎn)生 1nmoL 的對硝基*酚(PNP)為一個酶活單位。 MFO(nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.0009)÷3.8038×103×V1]÷V1÷T=8.8×(ΔA+0.0009) V---加入提取液體積,1 mLV1---加入樣本體積,0.25mLT---反應(yīng)時間,30 minW---樣本質(zhì)量,gCpr---樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;建議使用本公司的蛋白含量測定試劑盒。 附:標準曲線制作過程: 1 制備標準品母液(10μmoL/mL):向標準品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸餾水超聲溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品:00.060.120.180.240.3 μmoL/mL也可根據(jù)實際樣本來調(diào)整標準品濃度。 3 依據(jù)加樣表操作,根據(jù)結(jié)果即可制作標準曲線。 試劑一 50 試劑二 300 試劑三 100 混勻,立即于 405nm 處讀取吸光值 A137℃孵育 30min 后讀取 A2ΔA=A2-A1



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