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上海宇淳生物科技有限公司

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游離膽gu醇(FC)含量試劑盒
游離膽gu醇(FC)含量試劑盒
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更新時(shí)間:2024-05-24 14:50:29瀏覽次數(shù):337

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【簡(jiǎn)單介紹】
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游離膽gu醇(FC)含量試劑盒
游離膽gu醇(FC)不僅參與形成細(xì)胞膜,而且是合成膽汁酸,維生* D 以及甾體激素的原料。其血清濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。

游離膽gu醇(FC)含量試劑盒

游離膽gu醇(FC)含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 游離膽*醇(Free cholesterol, FC)含量試劑盒說(shuō)明書(shū) (貨號(hào):WS1190F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 游離膽*醇(FC)不僅參與形成細(xì)胞膜,而且是合成膽汁酸,維生* D 以及甾體激素的原料。其血 清濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。 游離膽*醇(FC)在膽*醇氧化酶作用下被氧化生成 4-膽甾烯酮和 H2O2;接著與 4-氨基氨替吡啉等 反應(yīng)生成紅色醌類化合物,其在 510nm 處有特征吸收峰,通過(guò)檢測(cè) 510nm 處吸光值,即可得出 FC 含量。 二、試劑盒的組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部,再加 2.2mL 蒸餾水,充分震蕩溶解 試劑二 液體 18mL×1 4℃保存 試劑三 液體 12mL×1 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1mL×1 4℃保存 三、所需的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、可調(diào)式移液槍、水浴鍋、離心機(jī)、 研缽、蒸餾水。 四、游離膽*醇(FC)含量測(cè)定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中,加入 1mL 提取液,在冰上進(jìn)行勻漿,12000rpm4℃或室溫離心 10min,取上清液待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(104):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:澄清的液體樣本直接測(cè)定,若渾濁則離心后取上清檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)① 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 510 nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 所有試劑解凍至室溫(25℃)。 ③ 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 (僅做一次) 空白管 (僅做一次) 標(biāo)準(zhǔn)品 80 樣本 80 試劑一 40 40 40 試劑二 340 340 420本試劑盒僅供科研使用 2 試劑三 240 240 240 混勻,避光孵育 60min,全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿 中,于 510nm 處讀取各管吸光值 A【注】:若測(cè)定管的 A 值大于 1.5,則需將樣本進(jìn)行稀釋(用提取液稀釋)或減少樣本加樣量 V1(如減至 40μL,則試劑二相應(yīng)增加),稀釋倍數(shù) D 或樣本量 V1 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算: 1、按樣本質(zhì)量計(jì)算 FCμg/g 重量)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V2) ×Mr×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D =193.3×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白) ÷W×D 2、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算: FCμg/104 cell=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V2) ×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D =0.39×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白) ×D 3、液體中 FC 含量計(jì)算: FCμg/mL=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V2) ×Mr×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =193.3×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白) C 標(biāo)準(zhǔn)---0.5μmol/mLMr=386.6---膽*醇分子量; V1---樣本加入體積,0.08mLV2---標(biāo)準(zhǔn)品加入體積,0.08mLV---提取液體積,1mLD---稀釋倍數(shù); 500---細(xì)胞數(shù)量; W---樣本取樣質(zhì)量。



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