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上海宇淳生物科技有限公司

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土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)測試盒,微板法
土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)測試盒,微板法
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【簡單介紹】
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土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)測試盒,微板法
土壤亮an氨酸氨基肽酶(LAP,EC 3.4.11.1)是一類能水解肽鏈 N-末端為亮an酸的酶,由土壤微生物分泌。該酶活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關。

土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)測試盒,微板法

土壤亮an酸氨基肽酶(S-LAP)測試盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤亮*酸氨基肽酶(Solid-Leucine Aminopeptidase,S-LAP試劑盒說明書 貨號:WS9230W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 土壤亮*酸氨基肽酶(LAPEC 3.4.11.1)是一類能水解肽鏈 N-末端為亮*酸的酶, 由土壤微生物分泌。該酶活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關。 土壤亮*酸氨基肽酶(S-LAP)分解 L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺,該物質(zhì)在 405nm 有吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算 S-LAP 活性。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存條件 備注 試劑一 液體 120mL×1 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×2 -20℃保存 臨用前甩幾下,使試劑落入底 部,再加 2.7mL 乙醇混勻溶解。 試劑三 液體 70mL×1 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 4℃保存 若重新做標曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、恒溫振蕩培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、天平。 四、土壤亮*酸氨基肽酶(S-LAP)活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實 驗樣本和試劑浪費! 1、樣本處理: 取新鮮土樣或干土(風干或者 37 度烘箱風干),先粗研磨,過 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】土壤風干,減少土壤中水分對于實驗的干擾;土壤過篩,保證取樣的均勻細膩; 2、上機檢測: ① 酶標儀預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 405nm② 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測定管 對照管 空白管(僅做一次) 土樣(g0.05 0.05 試劑一 450 500 450 試劑二 50 50 充分混勻,37℃培養(yǎng) 1 小時(振蕩培養(yǎng)或間隔 20min 手動振蕩混勻 幾下) 試劑三 300 300 300 混勻,8000rpm 離心 5min(若上清液不澄清可加大離心力),取 200μL 上清液至 96 孔板中,405nm 下讀取吸光值 AA=A 測定- A 對照-A 空白(每個樣本做一個自身對照)。 【注】:1.ΔA 較小,可延長 37℃的孵育時間 T(如增至 4 小時或更長),或增加土樣質(zhì) W(如增至 0.2g)。則改變后的 T W 需代入計算公式重新計算。 2.若測定管 A 值大于 1.5 A 大于 1.5,可縮短 37℃的孵育時間 T(如減至 0.5 小時或更短)。 則改變后 T 需代入計算公式重新計算。或對最后一步的待檢測上清液(包括測定管、對照管 和空白管)同時用蒸餾水進行稀釋,稀釋倍數(shù) D 代入計算公式。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算: 1、標準曲線方程:y = 0.0078x - 0.0024x 為標準品摩爾質(zhì)量(nmol),y A2、單位定義:每小時每克土樣生成 1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。 S-LAP(nmol/h/g 土樣)=(ΔA+0.0024)÷0.0078÷W÷T×D=128.2×(ΔA+0.0024)÷W×D T---反應時間,1hW---土壤樣本實際取樣量,gD---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1附:標準曲線制作過程: 1 制備標準品母液(10μmol/mL):臨用前甩幾下或離心,使粉體落入底部,加入 0.5mL 乙醇,渦旋震蕩溶解后再加入 0.5mL 的蒸餾水混勻,得到 10μmol/mL 備用。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度:0,0.4,0.8,1.2,1.6, 2μmol/mL。也可根據(jù)實際樣本來 調(diào)整標準品濃度。 3 EP 管依次加入:50μL 標準品+450μL 試劑一+300μL 試劑三,混勻,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 下讀取吸光值,根據(jù)結果制作標準曲線。




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