上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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參考價(jià) | ¥1850 |
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型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷(xiāo)商 -
所在地
上海市
48T | 1850元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間:2024-05-23 10:09:54瀏覽次數(shù):318
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土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性試劑盒,微板法
土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶活性試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū) (貨號(hào):WS5430W 微板法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa,EC 3.2.1.55)是一種能夠水解非還原呋喃阿拉 伯糖殘基的糖苷酶類(lèi)。 本試劑盒提供一種簡(jiǎn)單,靈敏,快速的測(cè)定方法,S-α-Afa分解對(duì)-硝基苯阿拉伯呋喃 糖苷生成對(duì)-硝基*酚(PNP),后者在405nm有吸收峰,通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率即 可得出α-Afa酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部,再 加 15.5mL 試劑一,充分溶解備用。 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑 三、所需的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、蒸餾水。 四、土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性測(cè)定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: 取新鮮土樣或者 37 度烘箱風(fēng)干(需先粗研磨),過(guò) 40 目篩網(wǎng),備用。 2、上機(jī)檢測(cè): ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 405 nm。 ② 在離心管中依次加入下列試劑: 【注】:1. 若 A 測(cè)定超過(guò) 1.8,可對(duì)最后一步的待檢測(cè)上清液(測(cè)定管和對(duì)照管)同時(shí)進(jìn)行稀釋?zhuān)ㄓ盟♂尲?可),稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式; 2.若ΔA 過(guò)小,可以增加土樣量或延長(zhǎng)保溫時(shí)間(如:2h 或更長(zhǎng)),重新調(diào)整的樣本量 W 和反應(yīng) 時(shí)間 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 3. 若同時(shí)檢測(cè)同一背景下的土壤樣本,此批土壤樣本可做一個(gè)樣本自身對(duì)照,節(jié)省時(shí)間;若是不 試劑名稱(μL) 測(cè)定管 對(duì)照管 土壤(g) 0.1g 0.1g 試劑一 300 試劑二 300 迅速混勻,37℃保溫 1h(間隔 15min 振蕩混勻一次) 試劑三 200 200 混勻,12000rpm,離心 5min,立即取上清液 200μL 于 96 孔板中,立即于 405nm 下讀取吸光值 A,△A= A 測(cè)定- A 對(duì)照(每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對(duì)照)。本試劑盒僅供科研使用 2 同背景下的土壤樣本(如黑土,紅土,黃土等),則每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對(duì)照,即按照說(shuō) 明書(shū)加樣表操作即可, 五、結(jié)果計(jì)算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.1292x - 0.0128;x 是標(biāo)準(zhǔn)品 PNP 質(zhì)量(μg), y 是△A。 2、活性定義:在 37℃,每小時(shí)每克土壤產(chǎn)生 1μg 對(duì)-硝基*酚(PNP)定義為 1 個(gè)酶活單位。 S-α-Afa(μg/h/g 土樣)=[(△A+0.0128)÷0.1292]÷W÷T×D=7.74×(△A+0.0128)÷W×D W---土壤樣品質(zhì)量,g; D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1; T---催化反應(yīng)時(shí)間,1 h; PNP 相對(duì)分子質(zhì)量---139.11。 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程: 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液(1mg/mL):向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水溶解,若有結(jié)晶 析出,需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 mg/mL。也可根據(jù)實(shí)際 樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在 EP 管中直接加入:10μL 標(biāo)準(zhǔn)品+290μL 試劑一+200μL 試劑三,混勻,立即取上 清液 200μL 于 96 孔板中,立即于 405nm 下讀取吸光值 A。 4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。