上海宇淳生物科技有限公司
主營產品: PCR八聯排管,sigma現貨,Cy7試劑 |

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參考價 | ¥ 325 |
訂貨量 | 1 |
- 型號 044
- 品牌
- 廠商性質 經銷商
- 所在地 上海市
更新時間:2019-05-16 10:30:19瀏覽次數:990
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活性氧檢測試劑盒
活性氧檢測試劑盒
100~500次 | ¥325 |
使用說明:
1. 裝載探針
對于刺激時間較短(通常為2小時以內)的細胞,先裝載探針,后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞。對于細胞刺激時間較長(通常為6小時以上)的細胞,先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞,后裝載探針。
原位裝載探針:本方法僅適用于貼壁培養細胞。按照1∶1000用無血清培養液稀釋DCFH-DA,使終濃度為10μmol/L。去除細胞培養液,加入適當體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜,通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1mL。37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。用無血清細胞培養液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20~30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。
收集細胞后裝載探針:按照1∶1000用無血清培養液稀釋DCFH-DA,使終濃度為10μmol/L。細胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中,細胞濃度為一百萬至二千萬/mL,37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。每隔3~5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細胞充分接觸。用無血清細胞培養液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞,或把細胞等分成若干份后刺激細胞。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20~30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。
說明:僅在陽性對照孔中加入Rosup作為陽性對照,其余孔不必加入Rosup。
2. 檢測
對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察,或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測,也可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。
3. 參數設置
使用488nm激發波長,525nm發射波長,實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強弱。DCF的熒光光譜和FITC非常相似,可以用FITC的參數設置檢測DCF。