定量測試方法主要應用于藥物、食品、化工等行業(yè)，用于定量測定某一特定物質或多種物質。在選擇物質定量分析方案時，需要考慮多種關鍵因素，如樣品體系、目標物的性質、樣品矩陣、靈敏度和檢出限、準確度和精密度、分析速度和成本，操作難度等。以上因素眾多，故選擇合適的定量分析方法尤其重要。
定量是指利用檢測器的響應信號（色譜，光譜峰面積或峰高）與待測組分的量（質量或濃度）成正比定量。
有機目標物定量可按照下圖選擇定量方案：
儀器方案定好后，為了定量更準確，還需要選擇一種或多種適合目標化合物定量分析的方法，在實際操作中，最好對比不同方法的優(yōu)缺點，并根據(jù)實驗結果進行調整和優(yōu)化。
常見的定量分析方法有：歸一化法、外標法、內標法、標準加入法等。
一、 歸一化法
將所有出峰組分的含量之和按100%計的定量方法，稱為面積歸一法。
歸一法使用時需要滿足三個條件
1、樣品中所有組分都能從色譜柱流出
2、所有組分都能被檢測器檢出
3、能測定或查出所有組分相對校正因子
各組分含量的計算公式如下：
式中：C：含量 F：校正因子 A：表示峰面積
若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，當樣品中組分是同分異構體或同系物，Fi都很相近。
在計算時通常采用公式如下：
案例1 ： 當樣品主成分含量大于50%面積歸一定量結果如下圖
圖2 丙酮GC-FID純度分析
外標法又稱標準曲線法。取待測組分的純物質配成一系列不同濃度的標準溶液進行色譜分析，繪制峰面積與標樣含量的標準工作曲線，并擬合二者的線性方程式。
在計算時通常采用公式如下：
案例2：目標物標準品，用外標法定量時結果如下圖
圖3 測樣品中對二甲苯的準確含量，上圖為標準曲線
目前微譜已經(jīng)積累的成熟外標定量方法見表1
表1 化合物外標法定量典型案例表
選擇適宜的純物質作為內標物，準確稱量后加入待測樣品中，根據(jù)組分和內標峰面積的比值以及內標加入量進行定量。
在計算時通常采用公式如下：
內標物是原樣品中不含有的組分，否則會使峰重疊而無法準確測量內標物的峰面積。
內標物的保留時間應與待測組分相近，但彼此能分離(R≥1.5)。
內標物必須是純度合乎要求的純物質。
內標物需要準確稱量，其加入量要與被測組分的含量接近。
案例3：內標標準品，為了排除樣品基質干擾，用內標法定量時結果如下圖
標準加入法又稱疊加法，實際是一種特殊的內標法。以待測組分的純物質為內標物，加入到待測樣品中，然后在相同的色譜條件下，測定加入內標物前后待測組分的峰面積，從而計算待測組分的含量。
在計算時通常采用公式如下：
標準加入法每一個樣品都要配制三個以上的、含樣品溶液和標準溶液的混合溶液，因此，這種方法不適于大批樣品的分析。在難以找到合適內標物時，可作為內標法的一種延伸。
定量分析要求目標組分都必須分離，能被檢測器檢測到，并且濃度在檢測器的線性范圍內，不同方法適用于不同要求。
圖5 定量方法選擇導圖
外標法是所有定量方法的基礎，可以精確進樣量的情況下，常規(guī)分析通常都采用外標法。
歸一化法不要求精確進樣量，但要求所有組分都必須出峰，或者所有出峰組分的總含量已知。歸一化法也可用于外標法定量后，對總量進行歸一化誤差修正。
內標法的關鍵是要能夠找到合適的內標物。內標法的稱量引起的誤差小于色譜正常定量分析誤差，內標和目標物結構差異大時常需要校正。
標準加入法常用來輔助判定假陽性，這種方法可以消除基體干擾。
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