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技術文章

ELISA試劑盒操作

閱讀:436發(fā)布時間:2020-10-27

ELISA試劑盒操作

1. 產(chǎn)品有哪幾種規(guī)格?可檢測多少個樣本?

產(chǎn)品分為48T和96T兩種規(guī)格。

每次實驗的標準曲線一般設5個不同濃度,加上空白孔,標準曲線一共需要1個孔。因此,一個48T試劑盒zui多可以測定42個樣本(不做重復且一次用完),一個96T試劑盒zui多可以測定90個樣本(不做重復且一次用完)。可以根據(jù)實際樣本數(shù)量和實驗計劃選擇合適的產(chǎn)品規(guī)格。


2.48T和96T的試劑盒有哪些不同?

48T和96T的試劑盒,每個孔的反應體系都是*一樣的。不同的是試劑盒中各組分的規(guī)格,詳見說明書。


3. 產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何?

產(chǎn)品在研發(fā)前期已通過嚴格的穩(wěn)定測試,發(fā)貨前亦須通過檢測并提供質檢報告,在市場上深受廣大客戶的贊許!


4.貴公司有沒有酶活性檢測的試劑盒?

酶活力的測定實際上就是測定酶促反應的速率。酶活力的大小即酶含量的多少,可以用每克酶制劑或每毫升酶制劑含有多少酶單位來表示,單位是U/g或U/ml。酶活力的測定方法:⑴測定完成一定量反應所需的時間,⑵測定單位時間內酶催化化學反應量。主要通過產(chǎn)物的增加量或底物的減少量來測定。常用的方法有:⑴分光光度法,⑵熒光法,⑶同位素測定法,⑷電化學法。

ELISA的方法一般是對可溶性抗原或抗體進行定性和定量的檢測,所以酶活性是不能用ELISA來檢測的。

 

5.一次ELISA實驗需要多長時間?

雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要1-2.5小時。


6.血清樣本如何處理?

全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。


7. 血漿樣本如何處理?

應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。


8. 尿液樣本如何處理?

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。


9.細胞上清液樣本如何處理?

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心10分鐘左右(5000×g)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。


10.   組織樣本如何處理?

用預冷的PBS (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將*碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣本對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,取上清檢測。


11.為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法?

小分子抗原或半抗原因為缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法。其原理是標本中的抗原和固相載體上的抗原競爭*化抗體上的結合位點,標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的*化抗體愈少,zuihou的顯色也愈淺,即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。


12.用什么軟件處理ELISA檢測的數(shù)據(jù)比較好?

ELISA標準曲線擬合可以應用Curve Expert軟件進行數(shù)據(jù)分析。它使用非常方便,可以生成漂亮的曲線應用到論文之中。軟件可以在下載中心進行下載。


13. 試劑盒做的結果不理想怎么辦?

實驗結果不理想請及時與客服或技術zhichilianxi,我們可以幫您一起分析實驗結果。如果僅憑實驗數(shù)據(jù)無法判斷,您可以將試劑盒發(fā)回給我們進行售后檢測。如果是試劑盒本身的質量問題,可以為您退換貨;如果是實驗操作的問題,技術人員可以給您一些改進的建議。


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