我司在ELISA中一般有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反響的完成需求有一定的溫度和時刻，這一保溫進程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當。
ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其中的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的時機，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的進程，因而需經擴散才干達到反響的終點。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反響總是需求一定時刻的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反響動力學研討時，試驗表明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經1-2小時，產物的生成可達高峰。
為加快反響，可提高反響的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過一夜，以構成zui多的沉淀。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予選用。
保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應貼著水面，使溫度迅速平衡。為避免蒸發，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規則的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能迅速平衡。
室溫溫育的反響，操作時的室溫應嚴格限制在規則的范圍內，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據說明書的要求操控溫育。室溫溫育時，ELISA板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時刻應按規則力求準確。為確保這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一起測定。
