ELISA實驗操作所要求的條件是比較嚴格的，無論是對實驗的硬件條件還是對實驗的操作人員的技術要求，都是如此。下面所提到的就是一些在進行ELISA試劑盒實驗時所要注意的一些問題。
ELISA實驗通用規則
1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但有專業人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。
4、實驗時，要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。
10、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
11、ELISA試劑盒洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
12、底物是光敏感的，要在臨用前現配。
13、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清，否則會影響結果。
16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。
17、應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數據的準確性。
18、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
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