為了保證所測得的ELISA結果準確，操作在實驗的過程中需要對常見問題及復雜步驟做足功課，掌握了各個步驟的隱患之后，再去實驗就會容易的多。其中，上海通蔚生物特別說明這些ELISA試劑盒步驟等您重點優化：
一、ELISA試劑盒加樣的優化
在這一過程中，一般情況下有三次加樣，它們分別是加標本，加酶結合物，加底物。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清天然凝固、收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。
二、ELISA試劑盒包被條件的優化
1.包被液的選擇：一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
2.包被濃度的選擇：包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質變化，一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml，ELISA試劑盒要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實驗來確定。
3.包被溫度的選擇：通常是4-8度條件下放置一個晚上或者37度保溫2小時，我們強烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。
4.包被抗原的選擇：可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板上，一般都先使其與無關蛋白質，比如BSA等偶聯，偶聯物吸附于固相載體上。
