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上海博湖生物科技有限公司
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實際篩選標準血清具體方法介紹
2024-1-8 閱讀(326)
現常用血清主要是牛血清、人血清、馬血清等。其中牛血清來源充足、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解，故而是常用的血清。牛血清有小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清是品質高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。
血清的質量標準:
1. 內毒素標準為不高于5EU/ml
2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數值偏高偏低都會影響實驗的正常進行
3. 血紅蛋白標準為不高于20mg/dl
4. pH。國產血清、大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，根據PH的高低可用來初步鑒別血清的來源
5. 微生物。包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等，大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無法過濾，很難全清除，但對血清質量影響不大。病原性病毒，在國產血清中幾乎90%以上都存在，是影響國產血清質量的重要原因之一。
在實際篩選時，主要從血清外觀和實驗操作時細胞的生長狀態進行。
從外觀上：
1. 顏色：根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度。胎牛血清或多或少總有點溶血，因為胎牛血清凝血功能差，紅細胞容易破裂；
2. 澄清度：高質量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低，表現為稀薄、清淡；
3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生，對血清質量沒有影響，沉淀的產生原因跟加工生產方式、是否反復凍融密切相關，在實驗操作中可能會對細胞觀察產生影響。
從性能上：
1. 細胞形態，在進行血清篩選時首先觀察細胞的生長形態是否產生明顯變化，以及觀察貼壁細胞的貼壁情況，細胞在不同血清培養中可能會出現形態上的差異；
2. 倍增時間，一般情況下會選擇倍增時間短的血清，值得注意的是血清的影響會傳至5代，在進行測試時，最好培養五代后進行計倍增時間的計算。
