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上海博湖生物科技有限公司
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科研抗體特異性選擇指南
2022-7-20 閱讀(778)
抗體(antibody)免疫細(xì)胞分泌免疫物質(zhì)，是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展，抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個領(lǐng)域，包括科學(xué)研究、診斷、治療等。
特異性（specificity）的本質(zhì)含義是“Connected with one particular thing only"即只與唯yi的特定事物相關(guān)，具有專一性。在免疫學(xué)上我們會說“抗體具有特異性"，指的就是抗體具有專一性，某一特定的抗體只能與唯yi 一種抗原結(jié)合。其實準(zhǔn)確來講是一類具有特定抗原表位的抗原，因為某些不同的抗原具有相同的抗原表位（稱為交叉抗原），也可與同一種抗體特異性結(jié)合。
雙特異性抗體
科研工作離不開抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，這幾種實驗方法中的抗體特異性選擇需要考慮的要點了解下，特異性的選擇主要需要考慮四個方面：蛋白特異性、種屬特異性、實驗方法特異性、標(biāo)記物的特異性。
1.蛋白特異性
針對需要檢測的蛋白查找抗體，幾個細(xì)節(jié)要區(qū)分：
a.重組蛋白如果不是全長表達，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。
b.內(nèi)源性蛋白好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進行序列比對，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。
c.磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點，不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制存在，不宜一概而論。
2.種屬特異性
同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。
a.目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息。
b.一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫的抗體，不過一般這種情況生產(chǎn)商不會受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請到免費的抗體樣品，則利于抗體選擇。
3.實驗方法特異性
目前使用抗體的實驗方法有很多，不同的使用方法過程中，因為對蛋白樣品的處理方式不一樣，蛋白的含量有差異，對抗體的識別表位和效價要求都是不一樣的。
4.標(biāo)記物的特異性
一般基于實驗操作的實驗方法不會使用帶有標(biāo)記的一抗，比如 WB、IHC 等，都是通過二抗類的試劑標(biāo)記達到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實驗，可能就會使用到直接標(biāo)記的一抗，比如流式實驗。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍，針對不通的參數(shù)要求選擇對應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實驗中，需要選配不同的熒光標(biāo)記物。
