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技術(shù)文章

細胞劃痕實驗介紹

閱讀:125發(fā)布時間:2022-12-8

一、實驗原理

 

細胞劃痕wound healing)法簡捷測定細胞遷移遠動和修復能力的方法類似體外傷口愈合模型,在體外培養(yǎng)或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中間區(qū)域劃線,去除部分的細胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設定的時間,取出細胞培養(yǎng)板,觀察周邊細胞的生長遷移能力,實驗通常需設定正常對照組和實驗組,實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)修復能力的不同可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。

 

二、實驗步驟

 

1.所有要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min
2.1)先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,大約每隔0.5-1cm一道,橫穿過孔,每孔至少穿過5條線。
  2)在空中加入約 5×105個細胞(具體數(shù)量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿),37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
  3)第二天用10µl槍頭比著直尺,與標記線垂直的方向劃兩條平行線,槍頭要垂直,不能傾斜。
  4)用PBS洗細胞3次,去除劃下的細胞,加入無血清培養(yǎng)基。

 

三、注意事項

 

1.在用PBS緩沖液沖洗時,注意貼壁慢慢加入,以免沖散單層貼璧細胞,影響
實驗拍照結(jié)果。
2.一般做劃痕實驗,都是無血清或者低血清(<2%),則細胞增殖就不能忽略
(也可用絲裂處理一小時)
3.按照6孔板背后畫線的直方向劃痕,可以形成者干交叉點,作為固定的檢
測點,以解前后觀察時位置不固定的問題。



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