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閱讀：86發(fā)布時(shí)間：2022-11-29
單克隆抗體和多克隆抗體的區(qū)別
一、單克隆抗體
（一）單克隆抗體
單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。
1975年分子生物學(xué)家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上，創(chuàng)建立雜交瘤技術(shù)，他們把可在體外培養(yǎng)和大量增殖的小鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)抗原免疫后的純系小鼠B細(xì)胞融合，成為雜交細(xì)胞系，既具有瘤細(xì)胞易于在體外無限增殖的特性，又具有抗體形成細(xì)胞的合成和分泌特異性抗體的特點(diǎn)。將這種雜交瘤作單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，可形成單細(xì)胞系，即單克隆。利用培養(yǎng)或小鼠腹腔接種的方法，便能得到大量的、高濃度的、非常均一的抗體，其結(jié)構(gòu)、氨基酸順序、特異性等都是一致的，而且在培養(yǎng)過程中，只要沒有變異，不同時(shí)間所分泌的抗體都能保持同樣的結(jié)構(gòu)與機(jī)能。這種單克隆抗體是用其他方法所不能得到的。
（二）優(yōu)勢(shì)和局限性
1．單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)
(1)雜交瘤可以在體外存活并傳代，只要不發(fā)生細(xì)胞株的基因突變，就可以不斷地生產(chǎn)高特異性、高均一性的抗體。
(2)可以用相對(duì)不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。
(3)由于可能得到均一性抗體，所以適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法，如IRMA和ELISA等。
(4)由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學(xué)功能，可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療。
2．單克隆抗體的局限性
(1)單克隆抗體固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍。由于單克隆抗體不能進(jìn)行沉淀和凝集反應(yīng)，所以很多檢測(cè)方法不能用單克隆抗體完成。
(2)單克隆抗體的反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體。
(3)制備技術(shù)復(fù)雜，而且費(fèi)時(shí)費(fèi)工，所以單克隆抗體的價(jià)格也較高 。
（三）應(yīng)用
1．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)診斷試劑
作為檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的診斷試劑，單克隆抗體以其特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射免疫分析、免疫組化和流式細(xì)胞儀等技術(shù)。并且單克隆抗體的應(yīng)用，很大程度上促進(jìn)了商品化試劑盒的發(fā)展。
2．蛋白質(zhì)的提純
單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個(gè)惰性的固相基質(zhì)（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制備成層析柱。當(dāng)樣品流經(jīng)層析柱時(shí)，待分離的抗原可與固相的單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合，其余成分不能與之結(jié)合。將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強(qiáng)度或pH，欲分離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可得到欲純化的抗原。
二、多克隆抗體
（一）多克隆抗體
由多種抗原決定簇刺激機(jī)體，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機(jī)體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體。除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一種抗原決定簇，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。與單克隆抗體相比，大量多克隆抗體的生產(chǎn)相對(duì)快速且成本低廉。它們是非特異性的，因?yàn)樗鼈兡軌蜃R(shí)別任何一種抗原上的多個(gè)表位。
（二）優(yōu)勢(shì)和局限性
1.多克隆抗體的優(yōu)勢(shì)
（1）可以幫助增加 WB 信號(hào)，因?yàn)榭贵w將與多個(gè)表位結(jié)合。
（2）由于識(shí)別多個(gè)表位，多克隆抗體可以在 IP/ChIP 檢測(cè)中提供更好的結(jié)果。
（3）更能容忍抗原的微小變化，例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或輕微變性。
（4）當(dāng)抗原的性質(zhì)未知時(shí)很有用
（5）生產(chǎn)成本低，時(shí)間短
2.多克隆抗體的缺點(diǎn)
（1）更容易出現(xiàn)批次間的差異。
（2）多個(gè)表位使得檢查免疫原序列是否存在任何潛在的交叉反應(yīng)變得很重要。
（三）應(yīng)用
一種良好的多克隆抗血清含有抗某種抗原不同表位的多種抗體。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗體，包括變性—抗性的表位，所以，在深固定的樣本中也會(huì)發(fā)揮效應(yīng)，在石蠟包埋組織切片的染色中，多克隆抗體常選用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的不同需要，多克隆抗體應(yīng)用于相應(yīng)抗原的標(biāo)記。此外，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，多克隆抗體被用于農(nóng)藥殘留現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)；在臨床應(yīng)用中，多克隆抗體主要用于病原物的檢測(cè)、疾病的診斷及治療，如作為蛋白類免疫抑制劑用于移植反應(yīng)和自身免疫病的治療。
三、單克隆抗體與多克隆抗體制備流程的比較
經(jīng)過特定抗原處理過的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞通過細(xì)胞融合的方法得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選、ELISA檢測(cè)效價(jià)后就得到陽性克隆株，最后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)⒓?xì)胞注入到動(dòng)物（一般為balb/c小鼠）腹腔中用腹水培養(yǎng)，收集上清/腹水純化后就能得到單克隆抗體。而制備多克隆抗體就沒有單克隆抗體繁瑣，只需將抗原（純度越高越好）直接注入到動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行免疫，經(jīng)過3至4次免疫，ELISA測(cè)其效價(jià)合格后，收集血液離心得到上清，純化后即能得到多克隆抗體。因此多抗制備的周期就比單抗制備的短，制備價(jià)格也比單抗要低。
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