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卡梅德生物科技（天津）有限公司
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閱讀：83發(fā)布時間：2022-11-29
單克隆抗體和多克隆抗體的區(qū)別
一、單克隆抗體
（一）單克隆抗體
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。
1975年分子生物學家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術的基礎上，創(chuàng)建立雜交瘤技術，他們把可在體外培養(yǎng)和大量增殖的小鼠骨髓瘤細胞與經(jīng)抗原免疫后的純系小鼠B細胞融合，成為雜交細胞系，既具有瘤細胞易于在體外無限增殖的特性，又具有抗體形成細胞的合成和分泌特異性抗體的特點。將這種雜交瘤作單個細胞培養(yǎng)，可形成單細胞系，即單克隆。利用培養(yǎng)或小鼠腹腔接種的方法，便能得到大量的、高濃度的、非常均一的抗體，其結構、氨基酸順序、特異性等都是一致的，而且在培養(yǎng)過程中，只要沒有變異，不同時間所分泌的抗體都能保持同樣的結構與機能。這種單克隆抗體是用其他方法所不能得到的。
（二）優(yōu)勢和局限性
1．單克隆抗體的優(yōu)點
(1)雜交瘤可以在體外存活并傳代，只要不發(fā)生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產(chǎn)高特異性、高均一性的抗體。
(2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。
(3)由于可能得到均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。
(4)由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學功能，可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導向治療。
2．單克隆抗體的局限性
(1)單克隆抗體固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應用范圍。由于單克隆抗體不能進行沉淀和凝集反應，所以很多檢測方法不能用單克隆抗體完成。
(2)單克隆抗體的反應強度不如多克隆抗體。
(3)制備技術復雜，而且費時費工，所以單克隆抗體的價格也較高 。
（三）應用
1．檢驗醫(yī)學診斷試劑
作為檢驗醫(yī)學實驗室的診斷試劑，單克隆抗體以其特異性強、純度高、均一性好等優(yōu)點，廣泛應用于酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫分析、免疫組化和流式細胞儀等技術。并且單克隆抗體的應用，很大程度上促進了商品化試劑盒的發(fā)展。
2．蛋白質(zhì)的提純
單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個惰性的固相基質(zhì)（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制備成層析柱。當樣品流經(jīng)層析柱時，待分離的抗原可與固相的單克隆抗體發(fā)生特異性結合，其余成分不能與之結合。將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強度或pH，欲分離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可得到欲純化的抗原。
二、多克隆抗體
（一）多克隆抗體
由多種抗原決定簇刺激機體，相應地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體。除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一種抗原決定簇，也可刺激機體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。與單克隆抗體相比，大量多克隆抗體的生產(chǎn)相對快速且成本低廉。它們是非特異性的，因為它們能夠識別任何一種抗原上的多個表位。
（二）優(yōu)勢和局限性
1.多克隆抗體的優(yōu)勢
（1）可以幫助增加 WB 信號，因為抗體將與多個表位結合。
（2）由于識別多個表位，多克隆抗體可以在 IP/ChIP 檢測中提供更好的結果。
（3）更能容忍抗原的微小變化，例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或輕微變性。
（4）當抗原的性質(zhì)未知時很有用
（5）生產(chǎn)成本低，時間短
2.多克隆抗體的缺點
（1）更容易出現(xiàn)批次間的差異。
（2）多個表位使得檢查免疫原序列是否存在任何潛在的交叉反應變得很重要。
（三）應用
一種良好的多克隆抗血清含有抗某種抗原不同表位的多種抗體。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗體，包括變性—抗性的表位，所以，在深固定的樣本中也會發(fā)揮效應，在石蠟包埋組織切片的染色中，多克隆抗體常選用。根據(jù)實驗的不同需要，多克隆抗體應用于相應抗原的標記。此外，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，多克隆抗體被用于農(nóng)藥殘留現(xiàn)場監(jiān)測；在臨床應用中，多克隆抗體主要用于病原物的檢測、疾病的診斷及治療，如作為蛋白類免疫抑制劑用于移植反應和自身免疫病的治療。
三、單克隆抗體與多克隆抗體制備流程的比較
經(jīng)過特定抗原處理過的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞通過細胞融合的方法得到雜交瘤細胞，經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選、ELISA檢測效價后就得到陽性克隆株，最后進行細胞培養(yǎng)或將細胞注入到動物（一般為balb/c小鼠）腹腔中用腹水培養(yǎng)，收集上清/腹水純化后就能得到單克隆抗體。而制備多克隆抗體就沒有單克隆抗體繁瑣，只需將抗原（純度越高越好）直接注入到動物體內(nèi)進行免疫，經(jīng)過3至4次免疫，ELISA測其效價合格后，收集血液離心得到上清，純化后即能得到多克隆抗體。因此多抗制備的周期就比單抗制備的短，制備價格也比單抗要低。
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