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克必隆eTS抑制性差減雜交PCR試劑盒

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克必隆eTS抑制性差減雜交PCR試劑盒本產(chǎn)品是抑制性差減雜交技術(shù)（Supression Subtractive Hybridization，SSH）的基礎(chǔ)上開發(fā)的在第二代SSH的試劑盒，專門用于篩選差異表達(dá)的基因。本產(chǎn)品繼承了*代SSH的主要優(yōu)點(diǎn)（包括只需要0.5ug mRNA、不需要分離單鏈和雙鏈cDNA、通過(guò)抑制性PCR降低非特異性擴(kuò)增），同時(shí)還需有下列新特點(diǎn)：

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克必隆eTS抑制性差減雜交PCR試劑盒

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
克必隆eTS抑制性差減雜交PCR試劑盒	10次	詢價(jià)

本產(chǎn)品是抑制性差減雜交技術(shù)（Supression Subtractive Hybridization，SSH）的基礎(chǔ)上開發(fā)的在第二代SSH的試劑盒，專門用于篩選差異表達(dá)的基因。本產(chǎn)品繼承了*代SSH的主要優(yōu)點(diǎn)（包括只需要0.5ug mRNA、不需要分離單鏈和雙鏈cDNA、通過(guò)抑制性PCR降低非特異性擴(kuò)增），同時(shí)還需有下列新特點(diǎn)：
1. 用產(chǎn)生粘性末端的內(nèi)切酶和粘性連接子，連接效率從40%增加到100%。。
2. 在PCR前增加了去除殘留酶的步驟，進(jìn)一步降低了背景。
3. 提供pUC18作為對(duì)照DNA，便于加在樣品中分別監(jiān)控差減效率和富集效率。
4. 本產(chǎn)品足夠10次雙向SSH雜交實(shí)驗(yàn)和600次30 uL體系的PCR。整個(gè)過(guò)程需2天。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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