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RAPD PCR試劑盒(含銀染)RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)即隨機擴增多態性DNA標記,它是建立在PCR(Polymerase Chain Reaction)基礎之上的一種可對整個未知序列的基因組進行多態性分析的分子技術。它以基因組DNA為模板, 以單個人工合成的隨機多態核苷酸序列(通常為10 個堿基對)為引物,在熱穩定的DNA 聚合酶(Taq 酶)
RAPD PCR試劑盒(含銀染)
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
RAPD PCR試劑盒(含銀染) | 100次 | 詢價 |
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RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)即隨機擴增多態性DNA標記,它是建立在PCR(Polymerase Chain Reaction)基礎之上的一種可對整個未知序列的基因組進行多態性分析的分子技術。它以基因組DNA為模板, 以單個人工合成的隨機多態核苷酸序列(通常為10 個堿基對)為引物,在熱穩定的DNA 聚合酶(Taq 酶)作用下, 進行PCR 擴增。擴增產物經瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后,在紫外儀上檢測多態性。擴增產物的多態性反映了基因組的多態性。RAPD 技術現已廣泛的應用于生物的品種鑒定、系譜分析及進化關系的研究上。本試劑盒除了含有RAPD PCR所需要的Taq酶,引物及緩沖液以外,還包含了后續的核酸銀染試劑,免去了制備染色試劑的的繁瑣過程,使實驗效率大大提高。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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