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上海聯邁生物工程有限公司
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cDNA文庫構建試劑盒利用真核生物的各種組織或細胞中的Poly（A）+ RNA合成cDNA，然后進行基因克隆，這在分子生物學實驗中被廣泛應用。這一技術的使用，使基因的結構解析及目的蛋白的表達等變得更為方便。一般合成cDNA以及構建cDNA Library的方法為： ① 合成與目的Poly（A）+ RNA相互補的雙鏈cDNA；② 將雙鏈cDNA與細菌或病毒來源的載體進行重組； ③ 將重組體導入細菌或
cDNA文庫構建試劑盒
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
cDNA文庫構建試劑盒 | 5次 | 詢價 |
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利用真核生物的各種組織或細胞中的Poly(A)+ RNA合成cDNA，然后進行基因克隆，這在分子生物學實驗中被廣泛應用。這一技術的使用，使基因的結構解析及目的蛋白的表達等變得更為方便。一般合成cDNA以及構建cDNA Library的方法為： ① 合成與目的Poly(A)+ RNA相互補的雙鏈cDNA；② 將雙鏈cDNA與細菌或病毒來源的載體進行重組； ③ 將重組體導入細菌或真核細胞內進行擴增， 構建cDNA Library。構建成的cDNA Library可以用于cDNA的解析，或者進一步進行體外轉錄或體外翻譯等。本試劑盒是以動植物由來的Poly(A)+ RNA為模板合成雙鏈cDNA后，將雙鏈cDNA與Plasmid Vector進行重組，構建質粒cDNA Library的試劑盒。試劑盒中使用的載體pAP3neo含有SV40啟動子，可以在哺乳動物細胞內進行表達 具有下列特點：
1. 操作簡便：使用Ready-to-Use型試劑。
2. 高靈敏度：能夠高靈敏度地檢出凋亡細胞的片斷化DNA。
3. 高特異性：抑制完整的染色體DNA的混入，選擇性地提取斷片化DNA。
4. 快速操作：整體操作約需2.5小時。
5. 定 量 性： 與熒光色素組合可以對片斷化DNA進行定量。
6. 安 全 性： 不使用苯酚等。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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