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Novablue(DE3)大腸桿菌

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更新時間:2018-06-14 15:28:13瀏覽次數:468次

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Novablue(DE3)大腸桿菌NovaBlue是K12衍生菌株,主要用來進行質粒的克隆和復制。DE3是溶源性的 λDE3,所以帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體,及其他T7啟動子系列載體。菌株內F游離因子上面的DE3溶源噬菌體上含有lacI基因的抑制子。作為含有DE3的宿主菌Novablue(DE3)無法用于藍白斑篩選。Novablue(DE3)具有四環素抗性。

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Novablue(DE3)大腸桿菌

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Novablue(DE3)大腸桿菌

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NovaBlue是K12衍生菌株,主要用來進行質粒的克隆和復制。DE3是溶源性的 λDE3,所以帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用Novablue(DE3)大腸桿菌于pET系列載體,及其他T7啟動子系列載體。菌株內F游離因子上面的DE3溶源噬菌體上含有lacI基因的抑制子。作為含有DE3的宿主菌Novablue(DE3)無法用于藍白斑篩選。Novablue(DE3)具有四環素抗性。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,Novablue(DE3)大腸桿菌離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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5-Fluorouracil(5-氟脲嘧啶)

Ac-DEVD-FMK(Caspase 3 Inhibitor)

Ac-IETD-FMK(Caspase 8 Inhibitor)

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Actinomycin D(基因轉錄抑制劑)

AG 490 (JAK抑制劑)

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