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克必隆G載體（零背景克隆載體）

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更新時間：2018-06-13 16:17:53瀏覽次數：288次

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產品簡介

克必隆G載體（零背景克隆載體）本產品是高效零背景通用（General）克隆載體，其無背景克隆原理是該載體攜帶一自基因，多克隆位點在該基因之中，自身環化的載體其自基因正常表達，轉化細胞不能生長。只有當外源DNA插入片段打斷該自基因的正常編碼順序，轉化細胞才能生長，所以后得到的轉化子幾乎都是含有插入片段的重組子。

詳細介紹

克必隆G載體（零背景克隆載體）

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克必隆G載體（零背景克隆載體）	2ug	詢價

本產品是高效零背景通用（General）克隆載體，其無背景克隆原理是該載體攜帶一自基因，多克隆位點在該基因之中，自身環化的載體其自基因正常表達，轉化細胞不能生長。只有當外源DNA插入片段打斷該自基因的正常編碼順序，轉化細胞才能生長，所以后得到的轉化子幾乎都是含有插入片段的重組子。

1. 零背景，陽性率一般為95%，不用藍/白篩選，尤其適合于構建文庫用。

2. 適用于絕大部分常用的E.coli菌株，而市場上的同類產品一般都需要特殊的菌株作宿主。

3. 克隆步驟簡化，可一小時內即可完成。載體無需*酶切，無需去磷酸化，無需要純化片段。

4. 多拷貝復制起始位點（ori），便于大量制備質粒。

5. 質粒用量僅為常規方法的1/5。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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