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天凈沙單細胞RNA擴增試劑盒一個哺乳動物單細胞一般只有約10pg的總RNA,其中的mRNA只有1-5%(約10E5-10E6個分子),因此直接用單細胞進行mRNA擴增具有極大的技術難度。本公司進過精心研究,整合技術,開發出了可以直接用單個細胞進行mRNA擴增的試劑盒,本產品具有下列特點:
1. 雙向,既可用于制備正義的mRNA,也可用于制備反義的aRNA(antisense RNA)或cRN
天凈沙單細胞RNA擴增試劑盒
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
天凈沙單細胞RNA擴增試劑盒 | 80次 | 詢價 |
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一個哺乳動物單細胞一般只有約10pg的總RNA,其中的mRNA只有1-5%(約10E5-10E6個分子),因此直接用單細胞進行mRNA擴增具有極大的技術難度。本公司進過精心研究,整合技術,開發出了可以直接用單個細胞進行mRNA擴增的試劑盒,本產品具有下列特點:
1. 雙向,既可用于制備正義的mRNA,也可用于制備反義的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用單細胞裂解液進行反應,免RNA提取,整個過程只需要半天。
3. 適用于多種單細胞,包括卵細胞、干細胞、FACS分離細胞等單細胞,還可用于培養細胞和胚胎等實體租組織(需要單細胞化),也可以使用10pg-10ng純化的總RNA作為模板。
4. 假陰性和假陽性率均小于6%,RNA擴增成功率為90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后續的RT-PCR、芯片雜交、表達譜分析等實驗。
6. 本試劑盒足夠對80個單細胞進行單細胞RNA擴增。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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