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玻璃珠法柱式真菌DNAout

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更新時間:2018-06-11 21:20:21瀏覽次數:414次

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產品簡介

玻璃珠法柱式真菌DNAout真菌DNA提取是一個難題,一是因為真菌有菌絲體、孢子等多種*不同的結構形態,二是因為其細胞壁一般都很厚,比較難以破碎。本產品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產品,它利用 法破碎細胞,主要用于從真菌孢子和液體培養的真菌細胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAOUT采用液氮研磨法破碎細胞,適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA)。本產品具有下列特點:
1. 即開即

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玻璃珠法柱式真菌DNAout

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玻璃珠法柱式真菌DNAout

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真菌DNA提取是一個難題,一是因為真菌有菌絲體、孢子等多種*不同的結構形態,二是因為其細胞壁一般都很厚,比較難以破碎。本產品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產品,它利用 法破碎細胞,主要用于從真菌孢子和液體培養的真菌細胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAOUT采用液氮研磨法破碎細胞,適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA)。本產品具有下列特點:
1. 即開即用,提供包括玻璃珠、離心吸附柱在內的所有試劑和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎細胞,屬于物理方法,遠比基于蝸牛酶或破壁酶的溫和化學破壁法重復性好,也不容易帶入外源真菌DNA(注:文獻報道蝸牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染,用于提取真菌DNA往往會造成污染)。
3. 本方法提取一個樣品只需要10余分鐘,方便、快速和高效。
4. 一次可以處理5 mL的過夜真菌培養物,所得的基因組DNA OD260/OD280一般都在1.8左右,長度一般在20 Kb左右,每mL菌液的DNA產率一般在1-3 μg??梢灾苯佑糜赑CR和酶切等后續試驗。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
相關產品列表:
Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH5.5 
Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.0 
Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.5 
Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH7.0 
Manganese Chloride Solution(化錳溶液),1M 
Manganese Sulfate Solution(硫酸錳溶液),0.5M 
Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH2.5 


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