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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-05-28 15:21:30瀏覽次數(shù)：787次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線CHO-GS中國倉鼠卵巢細胞（STR鑒定）CHO-GS細胞是用含單抗蛋白等的目的基因和谷氨酰胺合成酶（GS）基因標記的表達載體，轉染宿主細胞CHO，再通過L-氨基亞砜蛋氨酸（methionine sulphoximine，MSX）等化合物選擇加壓促使GS基因和目的蛋白基因擴增，篩選獲得重組細胞株
英文名稱:Chinese Hamster Ovary cells （glutamine system）
CHO-GS中國倉鼠卵巢細胞（STR鑒定）
英文名稱：Chinese Hamster Ovary cells (glutamine system)
規(guī)格：1*10 6
細胞介紹
CHO-GS細胞是用含單抗蛋白等的目的基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因標記的表達載體，轉染宿主細胞CHO，再通過L-氨基亞砜蛋氨酸(methionine sulphoximine，MSX)等化合物選擇加壓促使GS基因和目的蛋白基因擴增，篩選獲得重組細胞株，可在不含谷氨酰胺培養(yǎng)基中生長、增殖，可避免或減少細胞代謝過程中谷氨酰胺降解積累的氨對細胞的損傷、抑制作用。
一、細胞特性
1） 來源：中國倉鼠卵巢
2） 形態(tài)：上皮細胞樣
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
二、細胞收到后處理
CHO-GS中國倉鼠卵巢細胞（STR鑒定）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
三、細胞培養(yǎng)步驟
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？
（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
★ 注：如運輸過程中導致細胞污染或者死亡，我們將無條件補發(fā) 收貨后十個工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價重發(fā)。
相關細胞系列表：
MC3T3-E1 Subclone 14；小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14 1×10^6 cells/瓶
Ana-1(ana1)；小鼠巨噬細胞 1×10^6 cells/瓶
TM4;小鼠支持細胞 1×10^6 cells/瓶
Sp2/0-Ag14;小鼠骨髓瘤細胞 1×10^6 cells/瓶
P388;小鼠白血病細胞 1×10^6 cells/瓶
NIT-1;小鼠胰腺β細胞 1×10^6 cells/瓶
MPC-83;小鼠胰腺腺泡細胞 1×10^6 cells/瓶
mpc5(MPC-5);小鼠腎足細胞 1×10^6 cells/瓶
Min6;小鼠胰島β細胞 1×10^6 cells/瓶
MC3T3-E1;小鼠胚胎成骨細胞前體細胞 1×10^6 cells/瓶
MC-38(MC38);小鼠結腸癌細胞株 1×10^6 cells/瓶
MA-891(MA891);小鼠乳腺癌高轉移細胞 1×10^6 cells/瓶
LTPA;小鼠胰腺癌細胞 1×10^6 cells/瓶
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