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MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細胞（STR鑒定）

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產品簡介

MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細胞（STR鑒定）從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。從含抗壞血酸培養基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長
英文名稱:Mouse Embryonic Osteoblasts Cells

詳細介紹

MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細胞（STR鑒定）
英文名稱：Mouse Embryonic Osteoblasts Cells
規格：1*10 ⁶
細胞介紹
從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。從含抗壞血酸培養基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現出高水平的成骨細胞分化。它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質（ECM）。MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595)和MC3T3亞克隆30(ATCC CRL-2596)在抗壞血酸中生長表現出很差的成骨細胞分化。不形成ECM，可以作為亞克隆4和14的陰性對照。礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨細胞標記的mRNA，及唾液酸糖蛋白(BSP)，骨鈣素(OCN)，和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關蛋白受體的mRNA。高或者低的分化潛能的亞克隆在培養中生產出相似數量的膠原質，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細胞相關轉錄因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細胞只是產生纖維組織。這些細胞系是研究體外成骨細胞分化的好模型，尤其是ECM信號。它們和原代培養顱頂成骨細胞的行為類似。
一、細胞特性
1）來源：顱頂骨
2）形態：成纖維細胞，貼壁長
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細胞收到后處理
MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細胞（STR鑒定）在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿*培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。
三、細胞培養步驟
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？
（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發；