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上海聯邁生物工程有限公司
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Human CLUSTERIN ELISA Kit
?規格： 96T
檢測范圍： 780pg/ml→50ng/ml。
特異性： 系統與其他細胞因子無交叉反應
敏感性： ＜5pg/ml
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（較長時間不用時）。
有效期： 6 個月（4℃） ；12 個月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、血漿、尿液、唾液、細胞裂解液或細胞培養上清。
Human CLUSTERIN ELISA Kit
規格： 96T
檢測范圍： 780pg/ml→50ng/ml。
特異性： 系統與其他細胞因子無交叉反應
敏感性： ＜5pg/ml
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（較長時間不用時）。
有效期： 6 個月(4℃) ；12 個月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、血漿、尿液、唾液、細胞裂解液或細胞培養上清。
Human CLUSTERIN ELISA Kit工作原理
Clusterin，凝聚素，是一種普遍存在的異源二聚體硫酸化糖蛋白, 其基因定位于人類染色體 8p21,
含 449 個氨基酸, 相對分子質量（Mr）為 75000～80000。它主要存在于細胞質中并被分泌到細
胞內環境, 由于 CLU mRNA 不同的剪切翻譯, 形成 sClusterin（sCLU）和 nClusterin（nCLU) 2
種變體, 分別發揮抗凋亡和促進凋亡的作用。在生理條件下, 主要參與脂質轉運、組織重建、 細
胞與基質間相互作用及細胞凋亡等生物學過程近年來眾多的研究結果表明, CLU 在腎細胞癌、
卵巢癌、 乳腺癌、 前列腺癌等多種惡性腫瘤的發生、 發展過程中起重要的癌基因作用。
所提供的人 CLUSTERIN ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預先包被的抗體和檢測相抗體都是多克隆抗體。檢測抗
體經生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS 或 TBS 洗滌。
隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。TMB
在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的
CLUSTERIN 呈正相關。
內容 | 規格 | 數量 |
預包被抗CLUSTERIN抗體的 96 孔板 | 96T | 1 |
凍干標準品 | 10ng/管 | 2 |
生物素標記 | 130ul | 1 |
親和素-過氧化物酶復合物 | 130ul | 1 |
樣品稀釋液 | 30ml | 1 |
抗體稀釋液 | 12ml | 1 |
ABC 稀釋液 | 12ml | 1 |
TMB 顯色液 | 10ml | 1 |
TMB 終止液 | 10ml | 1 |
洗滌緩沖液(25X) | 20ml | 1 |
封板膜 |
| 2 |
說明書 |
| 1 |
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規格酶標儀。
2. 自動洗板機。
3. 恒溫箱
4. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器。
5. 干凈的試管和 Eppendof 管。
6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍，成 1X 洗滌緩沖液。
注意事項
1． 使用前 TMB 顯色液應為無色透明溶液，若發現顏色異常，請及時與廠家。
2． 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
3 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。
4． 為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。
5． 禁止混用不同批次試劑盒內的試劑。
6. 本公司提供的 96 孔酶標板是單條可拆型酶標板，用戶可按需求使用；剩余的酶標板請
按保存條件貯存。
7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內，浸泡 1-2 分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
樣品的準備和保存
樣品如果不立即分析，應分裝后冷凍保存，且避免反復凍融。
細胞培養上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細胞裂解液——對于貼壁細胞，去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常 10 秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
樣品稀釋的一般原則
用戶須估計樣品待測因子的含量，決定適當的稀釋倍數，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的
稀釋方案：
高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。
中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。
低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。
特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。
操作程序總結：
1． 加樣品和標準品，37℃反應 90 分鐘。不洗。
2． 加生物素標記抗體，37℃反應 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。
3． 加 ABC，37℃反應 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。
4． TMB37℃反應 15-20 分鐘。
5． 加入 TMB 終止液，讀數。
人 活化蛋白C APC activated protein C
人 活化凝血因子Ⅻ FⅫa activated coagulation factor Ⅻ
人 活化凝血因子Ⅻ FⅫb activated coagulation factor Ⅻ
人 活化凝血因子X FXa activated coagulation factor X
人 活化凝血因子XIII FXIIIa activated coagulation factor XIII
人 活化凝血因子XIII FXIIIb activated coagulation factor XIII
人 活性氧簇 ROS reactive oxygen species
人 活性依賴性神經保護因子 ADNP Activity Dependent Neuroprotector Protein
人 饑餓素 ghrelin ghrelin
人 肌鈣蛋白I Tn-Ⅰ TroponinⅠ
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