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上海邦景實業有限公司
主營產品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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更新時間：2022-06-22 15:19:48瀏覽次數：194
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中文名稱：廣譜蛋白酶抑制劑混合物(含EDTA，100X)
英文名稱：Broad-spectrum protease inhibitor mixture (containing EDTA, 100X)
產品規格：1ml
發貨周期：1～3天
產品貨號：BJ-F0165134
生物醫學實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統方法的缺點，本公司開發了本產品。產品介紹：
細胞或組織提取物等樣品中含有許多內源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易導致提取物中的蛋白降解或去修飾，從而影響后續的蛋白檢測。因此在提取物等樣品中添加適當的蛋白酶、磷酸酶等抑制劑是防止蛋白降解和去修飾的有效方法。本產品可以有效抑制常規細胞或組織提取物中的各種蛋白酶活性，如絲蛋白酶、氨基肽酶、半胱蛋白酶、蘇和天冬蛋白酶、金屬蛋白酶等。 應用領域： 本產品適用于原代細胞，培養的哺乳動物細胞，動物組織，植物組織，酵母或細菌細胞等裂解物制備過程中蛋白的保護。 使用方法： 本蛋白酶抑制劑混合物為 100X 的儲存液，使用時按照 1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml 裂解液中加入 10μl 蛋白酶抑制劑混合物)，混勻后即可使用。含有蛋白酶抑制劑混合物的裂解液宜現用現配，不宜配制后凍存待后續使用。根據需要，0.1M 的 EDTA也按照 1:100 的比例加入到裂解液中。待所需的抑制劑添加完畢并混勻后，就可以開始進行常規細胞或組織的裂解和蛋白提取。 保存：-20℃保存，12個月有效 |
使用方法：本產品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關規定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發病的3天采集。
在安全柜內將本產品分裝到自備的、螺旋蓋內有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出。以同一拭子拭兩側鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內，擰緊蓋，在容器上標明有關信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內襯具吸水和緩沖能力的物質。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內送達，則應盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
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