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操作流程：
1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
2酶標板置4℃，包被過夜。
3洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。
6洗板，同4。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。
9洗板，同4。
10每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應。
12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13數(shù)據(jù)處理：在得出標本s和陰性對照n的 od值后，計算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標準。

試劑盒組成及試劑配制：
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關，我司嚴格按照進行，已獲得國家承認的“三證"，每一個產品都有對應的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用加入到標本稀釋液中使RF降解。
ELISA 試驗時，注意事項如下：
1. 正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1） 固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1～10μg／ml。
（3） 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。
RabbitE-Selectin兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)試劑盒  2-Acetylfluorene  781-73-7  中文名：2-乙酰芴  分子式：C15H12O 

rabbitEsadiol,E2兔子雌二醇(E2)試劑盒  2-Amino-2'-chloro-5-nitro benzophenone  2011-66-7  中文名：2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮  分子式：C13H9ClN2O3 

rabbitEsadiol,E2 兔子雌二醇(E2)試劑盒  進口分裝  2-Acetamidothiazole  中文名：2-乙酰氨基噻唑  分子式：C5H6N2OS  度：99.0%

RabbitEpidermalgrowthfactor,EGF兔子表皮生長因子(EGF)試劑盒  2-Acetyl-3-ethylpyrazine  32974-92-8  中文名：2-乙酰基-3-乙基吡嗪  分子式：C8H10N2O 

RabbitEpidermalgrowthfactor,EGF 兔子表皮生長因子(EGF)試劑盒  進口分裝  2-Acetylfluorene  中文名：2-乙酰芴  分子式：C15H12O  度：98.0%
1--4-正辛基苯(>98.0%(GC))  1-Bromo-4-n-octylbenzene  質量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱RatThyroglobulin大鼠甲狀腺球蛋白(TG)試劑盒

2,3,6,7,10,11-六甲氧基三亞苯(>95.0%(GC))  2,3,6,7,10,11-Hexamethoxytriphenylene  質量規(guī)格：>95.0%(GC) 酵母二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量檢測試劑盒20

2,3,6,7,10,11-六羥基三亞苯水合物(>95.0%(HPLC))  2,3,6,7,10,11-Hexahydroxytriphenylene Hydrate  質量規(guī)格：>95.0%(HPLC) HAase人透明質酸酶規(guī)格：48T/96T

2,3,6,7,10,11-六乙酰氧基三亞苯(>98.0%(HPLC))  2,3,6,7,10,11-Hexaacetoxytriphenylene  質量規(guī)格：>98.0%(HPLC) 小鼠第八因子相關抗原(FⅧAg)試劑盒 ，英文名： FⅧAg

2,3,6,7,10,11-六三亞苯(>98.0%(T))  2,3,6,7,10,11-Hexabromotriphenylene  質量規(guī)格：>98.0%(T) 大鼠TGF-β誘導早期基因1(TIEG1)檢測試劑盒RatTGF-beta-inducibleearlyresponsegene-1,TIEG1

(S)-(-)-1-苯乙醇(>98.0%(GC))  (S)-(-)-2-Methyl-1-butanol  質量規(guī)格：>98.0%(GC) 人白介素12受體亞基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)試劑盒 Human IL12RB1

(S)-(+)-4-甲基-1-己醇(>98.0%(GC))  (S)-(+)-4-Methyl-1-hexanol  質量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱MouseFree-Testoterone小鼠游離睪同(Free-Testoterone)

(S)-(+)-5-甲基-1-庚醇(>96.0%(GC))  (S)-(+)-5-Methyl-1-heptanol  質量規(guī)格：>96.0%(GC) picricacid-orangeGsolion溶液500毫升

(S)-(+)-6-甲基-1-辛醇(>98.0%(GC))  (S)-(+)-6-Methyl-1-octanol  質量規(guī)格：>98.0%(GC) Rabbit8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2α試劑盒兔8-異構前列腺素(8-epi-PGF2α)試劑盒

(S)-(+)-2-辛醇(>98.0%(GC))  (S)-(+)-2-Octanol  質量規(guī)格：>98.0%(GC) 小鼠抵抗素(RETN)試劑盒 ，英文名： RETN
小鼠脂聯(lián)素(ADP)elisa檢測試劑盒
LTB4豬白三烯B4檢測試劑盒山羊骨保護素(OPG)elisa檢測試劑盒

山羊骨保護素(OPG)elisa分析檢測試劑盒

山羊還原酶(GSR)elisa檢測試劑盒

山羊還原酶(GSR)elisa分析檢測試劑盒

山羊過氧化物酶(GSH-PX)elisa檢測試劑盒
注：本公司提供試劑盒免費代測服務。需要其他Elisa試劑盒請咨詢銷售人員。產品僅用于科研