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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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更新時間：2023-04-04 09:16:38瀏覽次數(shù)：243
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商品屬性：
產(chǎn)品名稱：人肺大靜脈平滑肌細胞
貨號：BJ-X97017
規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
分類：原代細胞
商品介紹：
名稱 人肺大靜脈平滑肌細胞 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人肺大靜脈平滑肌細胞分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中，把動脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個靜脈里流動脈血的血管。左右1對，共4條，兩條連接右肺，兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動脈高壓，是由于肺靜脈內(nèi)血液淤滯而引起的肺動脈高壓。正常情況下，肺循環(huán)具有血壓低、阻力小和順應(yīng)性大的特點，肺動脈壓力高低取決于單位時間內(nèi)肺動脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài)，必須保證整個肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻，血液順利地由肺動脈經(jīng)毛細血管進入肺靜脈，再入左心室，經(jīng)過左心室收縮進入體循環(huán)，才能避免肺動脈內(nèi)壓力升高。肺大靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。該細胞參與血管壁炎癥反應(yīng)，保持靜脈管腔的通暢，還是多數(shù)動脈疾病的靶細胞。 5.方法簡介： 公司實驗室分離的人肺大靜脈平滑肌細胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 公司實驗室分離的人肺大靜脈平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 成纖維細胞樣 傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳 消化液 0.25% 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：產(chǎn)品僅用于科研
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
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