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上海邦景實業(yè)有限公司
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羊駝肺來源細胞細胞傳代培養(yǎng)和注意事項
2018-11-27 閱讀(140)
| 提 供 商 | 上海邦景實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 14.5KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 140次 |
羊駝肺來源細胞細胞傳代培養(yǎng)
一、原理 細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。 傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分 瓶。
二、材料和試劑 1、細胞：貼壁細胞株 2、試劑：0.25%、1640培養(yǎng)基（含10%小牛血清） 3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等
三、操作步驟 1、將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。 2、加入0.5—1ml 0.25%溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。 3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。 4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。 附：消化液配制方法： 稱取0.25克蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。 溶液中也可加入EDTA，使zui終濃度達0.02%。
羊駝肺來源細胞注意事項：
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。
5. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術部溝通交流。
6. 該細胞只能用于科研，不得用于臨床應用。
