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elisa實驗的封閉劑如何選擇
2020-1-8 閱讀(4641)
常見的封閉劑是：BSA（牛血清白蛋白）、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST。
1、SA是常用的封閉劑，成分單一適用于大多數情況。若免疫原是偶聯BSA的， BSA有很強的免疫原性，會導致產生很多的針對BSA的抗體，為避免交叉反應，不能用BSA、脫脂奶粉等封閉，可以選用酪蛋白或無蛋白的封閉劑封閉。大部分BSA中有少量的抗體殘留，會導致抗原/抗體之間的交叉反應，產生高背景，雜帶較多或使得本底水平增高。
2、封閉血清的原理主要有兩點，一是待檢樣本會有些與蛋白非特異性結合的物質，從而導致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合，從這點看，BSA和血清沒有明顯區別。二是待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區結合，與抗體特異性無關，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合。BSA則無法封閉Fc受體。
3.脫脂奶粉的優點是價錢便宜，但是由于成分相對復雜，所以適用范圍要狹窄一些。磷酸化抗體也許會導致背景增加，此外，因為自身含有,不能用于標記的抗體系統。
4、酪蛋白 和BSA作用類似，普通酪蛋白不易溶解。中性和堿性條件下帶有負電性，與同樣帶負電荷膠體金之間存在排斥力，而膜一般都是帶正電荷，會與酪蛋白有一定的吸附作用，用酪蛋白封閉效果好些。
5、無蛋白化合物 甲醛：與PVDF膜表面的微結構反應或者結合，使之失去結合蛋白的疏水力或者空間結構域。去污劑(吐溫-20)：Tween-20是一種非離子型去污劑，有復性抗原的作用，與膜疏水性吸附，有很強的對非特異性吸附的洗脫作用，同樣可以降低蛋白間的疏水作用，可提高特異性的識別能力。
