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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞；HES操作流程
2019-12-6 閱讀(334)
十二月，天空中下起來(lái)鵝毛大雪，到處是一片白色，唯有松樹(shù)還是那樣鮮綠，點(diǎn)點(diǎn)雪片飄落在上面，好像是朵朵白花。接下來(lái)介紹人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞；HES操作流程。
細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來(lái)源于人胎盤(pán)組織。
2)細(xì)胞鑒定：血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子（PECAM-1/CD31）或血管假性血友病因子（vWF）免疫熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量，使的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
