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幼蚊細胞;C6/36說明書
2019-8-15 閱讀(341)
幼蚊細胞;C6/36說明書
時光匆匆消減了歲月,換來了成功!并肩奮斗跨越了高考,升入了大學!為了夢想不斷前行,定要闖下一片大好前程!兄弟,拼吧!接下來介紹 幼蚊細胞;C6/36說明書.
冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽儲存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
幼蚊細胞;C6/36說明書細胞傳代培養
一、原理 細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。 傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分 瓶。
二、材料和試劑 1、細胞:貼壁細胞株 2、試劑:0.25%、1640培養基(含10%小牛血清) 3、儀器和器材:倒置顯微鏡,培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等
三、操作步驟 1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。
2、加入0.5—1ml 0.25%溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將棄去,加入10ml培養液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養液塞好橡皮塞,置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。 附:消化液配制方法: 稱取0.25克蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。