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人源細胞實驗的基質效應
2018-9-18 閱讀(360)
人源細胞實驗的基質效應
基質是指樣品中目標分析物以外的部分,由于基質成分會對分析過程有顯著干擾,影響分析結果的準確性。業內把這些影響統稱為基質效應(Matrix Effects)。這是免疫檢測方法開發和使用中需要避開的大坑。
基質效應的原因錯綜復雜,但不用擔心,有兩種簡單的方法可以用來評估基質效應。
1. 線性稀釋:
一般來講,抗原和捕獲/檢測抗體之間的結合作用很強,樣品濃度被稀釋并不影響它們的結合,而造成基質效應的非特異結合的力要弱很多,如果不斷稀釋樣品,非特異結合造成的干擾會逐步減少,測量值也更接近真實值。沒有基質效應時,無論如何稀釋,測量值都和真實值吻合。而有基質效應時,稀釋會造成非特異性結合比例的減少,測量值也相應地產生很大改變。基質效應導致的結果有假陰性和假陽性兩種,在線性稀釋時就可以辨別出來。不同品牌的ELISA 試劑盒表現差距非常大。
2. 摻入/回收率實驗(Spike/Recovery Assay)
基質效應還可以通過分析物的摻入/回收率實驗發現,將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中,摻入前后實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率,回收率以百分比的形式呈現。回收率介于80-120%,才符合標準。
基質效應可以通過產品階段的優化盡可能去消除的。所以為什么一定要使用試劑盒配套的稀釋液?不合適的樣本稀釋液很多時候會加大基質效應,影響免疫反應體系,導致實驗誤差加大。在ELISA試劑盒領域,WKSUBIO系列的試劑盒是高品質的試劑盒。