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講述一些ELISA實驗中的小技巧

2022-10-24  閱讀(150)

ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。ELISA檢測原理:免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理,對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法,酶聯免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種,分三個部分組成:免疫識別,信號輸出和數據處理。下面講述一些ELISA實驗中的小技巧:

1.操作前應對實驗的物理參數有充分的了解,如環境溫度(保持在18C~25℃)、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。

2.正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說明書一致,否則可導致結果錯誤,實驗重復性差。

3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,洗滌次數不要超過說明書推薦的洗滌次數,洗液在反應孑L內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流,造成孔問污染,導致假陰性或假陽性。

4.要保證加液量一致ELISA試劑盒我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準,造成顯色不統一,判斷錯誤。

5.顯色液量不可過多加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下,加顯色系統后要避光反應,顯色液量不能過多,以免顯色過強。

ELISA試劑盒的影響因素應選用有國家批準文號,質量靠得住的產品,不能圖便宜,忽視質量保證。試劑應妥善保存于4℃冰箱內,在使用時先平衡至室溫,不同批號的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內用完,剩余的試劑下次用時應先檢查是否變質,顯色劑如被污染變色將造成全部顯色,導致錯誤結果。




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