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抗體制備三個階段工藝

2022-8-22  閱讀(2066)

    抗體是哺乳動物適應性免疫系統對抗病原體的核心,它是在病原體刺激下由漿細胞(效應B細胞)所分泌的一種免疫球蛋白,能夠識別并結合特異的病原體抗原,隨后通過介導中和作用、調理作用、效應T細胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術的飛速發展,抗體已經廣泛應用于生命科學各個領域,包括科學研究、診斷、治療等。

    抗體的制備歷史和工藝決定了抗體的質量和類型。抗體制備工藝可分為三個階段:傳統方法免疫動物獲得抗體、應用雜交瘤技術制備抗體和基因工程技術制備抗體。

1、傳統方法免疫動物制備抗體:

將通過各種方法獲得的免疫原(抗原)注射至動物(比如大鼠、小鼠和兔等)體內,刺激動物體內B細胞分化成熟,產生、分泌抗體,再通過收集動物血清,分離純化而獲得成品抗體。由于早期免疫原制備、純化技術和成本限制,早期通過傳統方法制備的抗體多為多克隆抗體。此種方法成本相對較低,但需要使用大量動物,容易導致“虐dai動物",甚至會因為虐dai動物而遭天價罰款,并禁止多克隆抗體銷售。

2、應用雜交瘤技術制備抗體:

1975年英國科學家Milstein和法國科學家Kohler將鼠源的B淋巴細胞同腫瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,雜交瘤細胞即具有B細胞的抗體、分泌功能,又具有腫瘤細胞的無限增殖功能。工藝上,首先采用皮下注射、腹腔注射和血管內注射等方式向動物體內注射免疫原,刺激動物產生特定的B細胞;然后處死動物,收集脾臟B細胞;體外融合B細胞和腫瘤細胞制備雜交瘤細胞,體外篩選、培養雜交瘤細胞;通過體外擴增雜交瘤細胞收集、純化培養基上清獲得抗體,或者在動物體內(血管內、腹腔等)注射雜交瘤細胞、收集和純化動物體液(腹水、血清等)獲得抗體。雜交瘤技術誕生了第一代單克隆抗體,這種抗體特異性高,易于大量。

3、基因工程技術制備抗體:

基因功能技術使得研究者能在體外重組——將任一基因片段插入到特定表達載體(質粒),通過將編輯好的質粒轉入特定的細胞系和細胞系的體外擴增、培養,獲得基因片段在體外的轉錄、翻譯,從而制備抗體。基因工程技術使得抗體的更加快速,并使得人源化抗體更為便捷,進而成為臨床應用的抗體藥物,用于臨床治療。這一技術產生的抗體是特異性ji高的均一抗體,易于工業化大量。近幾年,Abcam公司推出的重組單抗即為此類技術產生的抗體,特異性高,親和力強。





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