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干粉培養基原倍液的配制過程及注意點
2022-7-25 閱讀(415)
細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質，也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。現在詳細了解干粉培養基原倍液的配制:
一、配制過濾除菌的細胞培養基
1、 閱讀培養基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷an酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。
2、根據所需將培養基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內殘留培養基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。
3、 加入規定量的碳酸氫na及所要添加的物質。
4、 輕微攪拌溶解，加注射用水至規定體積。
5、 用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調pH至所需值。
6、 用0.22 μm濾膜正壓過濾除菌。
7、溶液應在2℃－8℃下避光保存。
具體使用方法參照培養基包裝袋上的說明書。
二、配制可高壓滅菌細胞培養基
1、根據所需將培養基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內殘留培養基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解
2、在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
3、 待溶液冷卻至室溫，加入無菌0.2 mol / L L－谷an酰胺溶液規定體積、無菌7.5％（w/v）碳酸氫na溶液規定體積，加注射用水（20℃～30℃）至規定體積，混勻。
4、如果必要，用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調pH至所需值。
5、溶液應在2℃－8℃下避光保存。
具體使用方法參照培養基包裝袋上的說明書
注意事項：
1、 細胞培養用水一般為三蒸水（經石英蒸餾器蒸餾）或超純水，醫藥上一般為注射用水。
2、 建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用，因為包裝一旦打開，組分可能會變質或因受潮而結團。
3、 溶解干粉培養基時先加入終體積90％－95％的培養用水，添加劑加完后再補足。
4、 如需添加的組分較多時，某一組分*溶解后，再添加另一組分。
5、 待培養基*溶解后再加入碳酸氫na，以免產生沉淀。
6、 所有成分*溶解后，培養基應立即過濾或高壓除菌，以免產生沉淀或有微生物污染。
7、 在過濾除菌時，一般情況下應調pH比所需值低0.1～0.2個單位，因過濾除菌后，pH值會升高約0.2。
8、在細胞培養過程中，建議不加或加少量的抗生素，如血清的濃度較低則所加抗生素的量也要相應降低一些。
9、 建議用1 N HCl或1 N NaOH來調節培養基的pH，因為用碳酸氫na來調對培養液的滲透壓影響比較大。
