氧滅菌后對潔凈車間沉降菌的檢測":A:操作方法：對潔凈車間用食品廠臭氧機滅菌1小時后進行沉降菌檢測
B:名稱：潔凈區微生物檢測操作規程
C:關鍵詞：潔凈區、食品廠臭氧機、車間臭氧機、微生物檢測
D:目 的：尋得優質食品廠臭氧機、車間臭氧機廠家 并規范潔凈區微生物檢測
E:原理：臭氧滅菌技術
F:適用范圍：100級、1萬、10萬、30萬級潔凈區環境。
1. 沉降菌檢測
1） 在萬級潔凈區內的關鍵操作點和潔凈室內每周檢測一次沉降菌和浮游菌；在10萬級潔凈區內其檢測頻次為每月檢測一次。30萬級每季度檢測一次沉降菌。
2） 由微生物檢測員按《養基的配制操作規程的要求配制肉湯瓊脂培養基，培養皿使用Φ90mm×15mm，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
3） 做好潔凈區消毒工作，開啟潔凈區凈化空調系統，正常運行不少于30分鐘；對單向流如100級的凈化工作臺和層流罩要在凈化系統運行10min后開始。
4） 靜態測試在除測試人員外，室內無生產人員的情況下進行，動態測試在已處于正常生產狀態下進行。
5） 采樣點布置選用對角線法，要求布置地面四個方向，工作線上左右，關鍵設備上放置一個。
6） 萬級、10萬級、30萬級的*少采樣點數可按下表確定。
| 面積m2 | 潔凈度級別10000 | 100000/300000 |
| <10 | 2 | 2 |
| ≥10~<20 | 2 | 2 |
| ≥20~<40 | 2 | 2 |
| ≥40~<100 | 4 | 2 |
| ≥100~<200 | 10 | 3 |
在滿足*少測點數的同時，還宜滿足*少培養皿數，見下表
| 潔凈度級別 | 所需Φ90mm×15mm（以沉降0.5h） |
| 100 | 14 |
| 10000 | 2 |
| 100，000/300,000 | 2 |
7） 百級區只有凈化工作臺下的局部范圍，其面積小于10m2，因此百級區取樣點至少為3個。
8） 測試人員按潔凈室級別規定的程序更換潔凈服進入潔凈區；靜態測試時，室內人員不得多于2人。
9） 將制備好的肉湯瓊脂培養基按采樣點布點位置離地0.8～1.5m處放置，打開培養皿蓋，暴露30分鐘，檢測人員及時填寫記錄，記錄房間溫濕度，壓差及測試狀態。
10） 蓋好皿蓋，將培養皿倒置于恒溫培養箱內，在30～35℃中培養48小時，并用3只培養皿作對照。
11） 用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察平皿上所有菌落數，要注意菌落與培養基沉淀物的區別，然后用5～10倍放大鏡檢查有否遺漏。
12） 計算平均菌落數 =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1號培養皿菌落數，M2：2號培養皿菌落數，n： 培養皿數。
13） 用平均菌落數判斷潔凈室空氣中的微生物， 潔凈區的平均菌落數（靜態測試）：100級≤1個/皿，萬級≤3個／皿，10萬級≤10個／皿，30萬級≤15個／皿。
14） 如超過標準，則必須對此區域重新消毒，重新采樣兩次，測試結果均須合格；否則要向質量管理部經理通報，并采取相應的措施。
15） 檢測人員必須向QA部門發“潔凈級別檢測記錄”，取樣和微生物培養及檢測人員均要在記錄上簽名，QA部門主管審核，記錄由質量管理部保存三年。
2. 浮游菌檢測
1） 對萬級和10萬級潔凈區要進行浮游菌的檢測，在萬級區內的關鍵操作點和潔凈室內每周檢測一次，10萬級潔凈區內其檢測頻次為每月檢測一次。
2） 浮游菌取樣使用浮游菌采樣器，采樣器必須要有流量計和定時量，并按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數據的可靠性。
3） 采樣器進入被測房間前要先用消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器是一直放在房間內；采樣時使用規定為Φ150mm×15mm培養皿。
4） 由微生物檢測人員按《培養基的配制操作規程》的要求配制營養瓊脂培養基，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
5） 浮游菌取樣與沉降菌一樣可分為靜態測試和動態測試兩種狀態；各種潔凈度的采樣點數目和*小采樣量如下表所示。
浮游菌取樣點數目及*小采樣量
| 潔凈度級別 | 面積m2 | *少采樣點 | *小采樣量（L/次） | 驗證 監測 驗證 監測 |
| 100 | ＜10 | 3 | 1000 | 600 |
| 10000 | ＜40 | 2 | 500 | 400 |
| 100000 | ＜100 | 2 | 100 | 50 |
6） 采樣點布點位置離地0.8～1.5m處放置，送風口測點位置離開送風面30cm左右；可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍增加測點；采樣點的布置與5）相同。
7） 對單向流如l00級凈化工作臺，測試要在凈化空調系統正常運行不少于l0min后開始；對非單向流，如緩沖室、培養室，測試要在凈化空調系統正常運行不少于30min后開始。
8） 采樣者必須穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養皿前，雙手要用消毒劑消毒；培養皿表面必須嚴格消毒。
9） 采樣口及采樣管在使用前必須高溫滅菌，要用消毒劑消毒采樣器的盤，轉盤以及罩子的內外面；對采樣管的外壁和內壁進行消毒后，要將管中的殘留液倒掉并晾干。
10） 儀器經消毒后先不放入培養皿，先接通電源，啟動真空抽氣泵抽氣不少于5min，使儀器中的殘余消毒劑蒸發。
11） 調好流量，轉盤轉速，已知采樣器的流量（L/min ），設定采樣時間（min），相乘即采樣量（L）；關閉真空泵。
12） 檢查每個培養皿的質量，培養基及培養皿有變質、破損或污染的不能使用，放入培養皿，蓋上蓋子后調節采樣器縫隙高度。
13） 對于單向流或逆風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向，對于非單向流采樣管口向上，布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口lm以上。
14） 除百級區外，在其他潔凈室采樣時，要在送風口和關鍵部位各進行一次采樣，每個采樣點只采樣一次。
15） 置采樣口于采樣點后，開啟采樣器，采樣時，測試人員要站在采樣口的下風側，靜態測試時，室內人員不得多于2人。
16） 采樣結束后取出培養皿，蓋上皿蓋并編號，注意防止采樣管對樣本的污染；要用消毒劑噴射罩子的內壁和轉盤，將采樣過程記錄在“潔凈級別檢測記錄”上。
17） 全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中30℃~35℃培養48h；每批培養基可選3只培養皿作對照培養，檢驗培養基本身是否污染。
18） 用肉眼直接計數，標記或菌落計數器上點計，然后用500倍放大鏡檢查，有否遺漏，若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。
19） 浮游菌評定標準：100級≤5/m3，萬級≤100/m3，10萬級≤500/m3
20） 微生物檢測人在“潔凈級別檢測記錄”上記錄檢測數據，并交QA部門主管審批，每個測點的浮游菌平均濃度必須低于設定的潔凈度標準的規定。
21） 若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新取樣兩次，兩次測試結果必須合格；否則要向質量管理部經理通報，并要采取相應的措施。
車間凈化無菌級別請參照國家消毒標準。
