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一步法恒溫支原體檢測試劑盒(細胞培養) | C4056L1060 | 48 T | -20℃ | 1050 |
產品描述
《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》主要用于檢測細胞培養上清或別的液體樣品（如血清）中是否含有支原體污染，該試劑盒僅用于基礎科研。
哺乳動物細胞的培養，支原體（Mycoplasma）污染是個世界性的問題。支原體污染幾乎可以改變細胞的所有參數，導致實驗結果的不準確、甚至*錯誤。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養都要進行支原體檢測。
本試劑盒可以檢測：（1）M.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3）M.Arginini、（4）M. hominis、（5）M. orale、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）Acholeplasma Laidlawii、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細胞的支原體（注：M.為Mycoplasma的縮寫）。以上13種支原體約占細胞支原體污染的99%以上，本試劑盒產品全部可以檢測。絕大多數支原體污染集中于前8種。注意：本試劑盒無法檢測Ureaplasma Urealyticum支原體！Ureaplasma Urealyticum在支原體污染種極其罕見。
與PCR法檢測支原體比較，本試劑盒產品優勢優勢顯著：
比較內容 | 支原體檢測PCR法 | 一步法恒溫支原體檢測試劑盒 |
操作時間 | 3小時 | 1小時 |
是否需要樣品處理 | 樣品處理，DNA提取 | 無需樣品處理，直接使用上清 |
靈敏度 | 靈敏度低 | 較PCR法提高1000倍 |
是否需要電泳 | 需要電泳及染色 | 不需電泳，結果目測 |
使用方法
1. 反應
（1）取三個反應管，分別標記為陽性對照管（Positive）、測試管（Test）和陰性對照管（Negative），各加入25 μL的水化溶液（-20℃保存的水化液可以放37℃水浴融化），吹吸數次直到所有凍干粉劑*溶解（凍干品較難溶解，需要緩慢吹吸約20-50下。此過程，如有大氣泡產生或者小氣泡過多，必須去除，否則嚴重影響反應結果！氣泡可以用套管離心的方法去除）。盡量在沒有操作過支原體的房間進行上述步驟。將所有反應管蓋子蓋上，在另外一個房間內進行下一步的操作。
（2）往陽性對照管中加入1 μL陽性支原體DNA，測試管中加入1 μL待測細胞培養液，陰性對照管不加。
（3）選擇以下方式之一進行反應：
① 水浴內反應：往每個反應管內加入25 μL礦物油，以防止水份揮發，蓋上蓋子，將反應管插入帶孔的漂板內，放入已經升溫到61℃的水浴內，準確反應60分鐘。
l 注：試劑盒所用的酶對溫度敏感，器顯示溫度與實際溫度的溫差盡量不超過0.5℃。如果溫差超過2℃，將導致酶活性降低，擴增速度也降低，在規定的反應時內，陽性對照可能無法呈現典型的藍綠色。此時需用水銀溫度計校準水浴的溫度。
② PCR儀上反應：有PCR儀的實驗室，強烈建議在PCR儀上進行反應，這樣可以準確控制反應的時間和溫度。PCR儀參數如下：61℃，60 min；20℃, ∞；熱蓋溫度，100 ℃。
l 注：在帶熱蓋的PCR儀上進行反應，無需在反應管內加入礦物油。
2. 結果判斷：61℃反應60分鐘后，立刻取出反應管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒（優選白色泡沫）為背景，通過反應管溶液顏色的變化，即可判斷檢測結果。如果溶液為藍綠色，則說明有支原體污染；如果為粉紅色或紫紅色，則說明沒有支原體污染（如圖1）。
l 注1：有時，同一批次陰性反應之間的顏色也可能會略有差異屬于正常現象，比如有些呈粉紅色，有些呈紫紅色。只在待測樣品與陽性對照一樣呈典型的藍綠色時，可判定為陽性，有支原體污染。
l 注2：反應結果的判斷，必須在反應后2小時內進行判斷，因為即使在室溫，擴增反應也會緩慢進行，反應管顏色也會逐漸變化，反應后長時間放置，可能出現錯判。
