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Blood Taq DNA聚合酶（免提取）

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上海宇玫博生物科技有限公司

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Blood Taq DNA聚合酶（免提取）
D1010L1179
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Blood Taq DNA 聚合酶來源于攜帶有突變的 Taq DNA 聚合酶

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Blood Taq DNA聚合酶（免提取）	D1010L1179	200 tests	-20℃	550

Blood Taq DNA聚合酶（免提取）	D1010L1179	1000 tests	-20℃	2450

產品描述

Blood Taq DNA 聚合酶來源于攜帶有突變的 Taq DNA 聚合酶基因的 E. coli 菌株，是截短后的 Taq DNA 聚合酶，缺失了 N 端的 5′結構特異性核酸內切酶結構域，缺失了 N 端的 280 個氨基酸；此外其基因內部發生了三個點突變。這些突變使它能夠耐受全血中存在的抑制劑, Blood Taq DNA 聚合酶其他性能與常規 Taq DNA 聚合酶沒有較大差異。此酶能夠擴增人和小鼠全血樣品中的 DNA 而無需事先提純。Blood Taq DNA 聚合酶在 25 μL 反應體系中能夠耐受高達 20%的全血（50 μL 反應體系中耐受 30%）。

Blood Taq DNA 聚合酶較其他同類產品單位活性高，單位反應成本低。

使用 Blood Taq DNA 聚合酶擴增人全血。1:5%血液+Na-EDTA；2:5%血液+K-EDTA；3:5%血液+ Na-肝素；4:5%血液+Na-檸檬酸；5:含有人干血的 1mm2 FTA GutherieCard；6:含有人干血的 1mm2 FTA Card（50 μL 水洗）。

運輸與保存方法

冰袋運輸。收到貨后-20℃避光干燥保存，1年有效。

使用方法

1. 反應體系配制。各組分在冰上*融化、混勻，按照下表進行加樣:

	組分	25 μL	50 μL	終濃度

5X Bloot Taq Reaction Buffer		5 μL	10 μL	1X

10 mM dNTP		0.5 μL	1 μL	0.2 mM

10	μM Forward Primer	0.75 μL	1.5 μL	0.3 μM (0.05-1 μM)

10	μM Reverse Primer	0.75 μL	1.5 μL	0.3 μM (0.05-1 μM)

Whole Blood		up to 2.5 μL*	up to 10 μL**

Blood Taq DNA		2 μL	4 μL

Nuclease-free H₂O		to 25 μL	50 μL

* ≤10% Recommended in 25 μL reaction volume. ** ≤=20% Recommended in 50 μL reaction volume.

1. 加血液樣品。先將其它組分用移液器上下混勻，然后將血液加在管子底部。

2. 將 PCR 管轉移至 95°C 預熱的 PCR 儀，開始循環。

注：若反應體系中包含>10%的血液，*用 50 μL 反應體系。 4. PCR 反應。* PCR 程序：通常為 30-40 個循環：

步驟	溫度	時間

Initial Denaturation	95°C	3 minutes

30-40 Cycles (Typically 35)	95°C	20 seconds
	50-68°C	30 seconds
	68°C	2minutes per kb

Final Extension	68°C	10 minutes

Hold	4-10°C

注意事項

1. DNA 模板: 全血樣品*用*、Na-EDTA、K-EDTA 或者檸檬酸鈉處理，雖然 Blood Taq DNA 聚合酶可以耐受 30% （v/v）的全血樣品，但為了達到擴增效果,5%–10%為建議的理想樣品量。干血如果存放在 Guthrie 卡或者 903 卡上(Whatman, NJ)，可以直接在 25μL 反應體系內加入 1mm punch disc。如果血液存放在 FTA paper (Whatman, NJ), 則先把 1mm punch disc

在 50μL dH₂O 中,50°C 條件下孵育 5 分鐘，然后棄去 50μL dH₂O，把 disc 直接放入 25 或 50μL PCR 反應體系中。

2. 引物：理想引物長度在 20–30 個核苷酸，GC 含量 40–60%。可用計算機軟件輔助進行引物設計，諸如 PrimerSelect™ (DNAStar Inc, Madison, MI)或者 Primer3 等軟件在引物設計和分析時均表現良好。每個引物在反應體系中的終濃度為 0.05–1μM, 0.3μM 時表現更佳。

3. dNTPs: 每種 dNTP *濃度為 200 μM。

4. 冷敏感: Blood Taq DNA 聚合酶增加了冷敏感性，包含部分熱啟動酶（Hot Start Taq）的特點，將反應體系至于冰上操作，并迅速置于 95°C 預熱的 PCR 儀可以將非特異性擴增降至zui低。

5. 變性溫度和時間: 在正式開始 PCR 循環前，*行 95°C，3 分鐘的預變性，可以確保血細胞得到充分裂解并釋放出 DNA

模板。

6. 退火溫度和時間: *退火時間持續 30 秒到 1 分鐘，退火溫度可以通過梯度 PCR 進行優化。梯度 PCR 時，退火起始溫度低于計算出 melting temperature (Tm)5°C。

7. 延伸時間: *延伸溫度為 68°C，zui后的延伸程序*為 10 分鐘，68°C。Blood Taq DNA 聚合酶延伸速度為 500bp/min.

關鍵詞：移液器