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維生素 D 基因檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）

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維生素 D 基因檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：

【包裝規(guī)格】 48 人份/盒

【預(yù)期用途】本試劑盒用于定性檢測(cè)人全血和唾液樣本中 VDR 基因 BsmI 位點(diǎn)、ApaI 位點(diǎn)和 FokI 位點(diǎn)的基

因多態(tài)性，進(jìn)行基因分型。

【檢驗(yàn)原理】本試劑盒采用 TaqMan-MGB 探針技術(shù)，對(duì)維

詳細(xì)介紹

維生素 D 基因檢測(cè)試劑盒(熒光 PCR 法)說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：維生素 D 基因檢測(cè)試劑盒(熒光 PCR 法)

【包裝規(guī)格】 48 人份/盒

【預(yù)期用途】 本試劑盒用于定性檢測(cè)人全血和唾液樣本中 VDR 基因 BsmI 位點(diǎn)、ApaI 位點(diǎn)和 FokI 位點(diǎn)的基

因多態(tài)性，進(jìn)行基因分型。

【檢驗(yàn)原理】 本試劑盒采用 TaqMan-MGB 探針技術(shù)，對(duì)維生素 D 的 VDR 基因 3 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，設(shè)計(jì) 3 套特

異性引物和探針組合，在一個(gè)反應(yīng)體系中通過兩種不同通道對(duì)檢測(cè)一個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性，同時(shí)針對(duì)β-珠蛋白

基因（HBB）保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針作為內(nèi)參對(duì)樣本的采集、DNA 的提取及擴(kuò)增進(jìn)行監(jiān)控。。

【主要組成成分】

序號(hào)	名稱	主要組成成分	規(guī)格（48 人份/盒）

1	反應(yīng)液 A	PCR 緩沖液、BsmI 引物和探針、內(nèi)標(biāo)引物和探針	1×960μL

2	反應(yīng)液 B	PCR 緩沖液、ApaI 引物和探針、內(nèi)標(biāo)引物和探針	1×960μL

3	反應(yīng)液 C	PCR 緩沖液、FokI 引物和探針、內(nèi)標(biāo)引物和探針	1×960μL

4	陽(yáng)性對(duì)照	質(zhì)粒混合液	1×100μL

5	陰性對(duì)照	H2O	1×100μL

【儲(chǔ)存條件及有效期】 試劑盒于-20℃±5℃避光貯存，有效期為 12 個(gè)月。

【適用儀器】 ABI 7500 熒光定量 PCR 儀。

【樣本要求】 本試劑盒適用于從全血和唾液樣本中提取人類基因組 DNA 進(jìn)行檢測(cè)。

【檢驗(yàn)方法】

1. PCR 前處理

a) 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

0) 從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫，各組分充分融解，渦旋混勻，瞬時(shí)低速離心。

2）核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)（N），按照 20μl/孔的分裝量將 3 種反應(yīng)液分裝到 N 個(gè) PCR 反應(yīng)管內(nèi)。

PCR 反應(yīng)管通過傳遞窗轉(zhuǎn)移至樣本處理室，剩余試劑放回-20℃±5℃冰箱避光保存。

N=（樣本數(shù)+陰性對(duì)照（1T）+陽(yáng)性對(duì)照（1T））×3。

b) 樣本提取（樣本準(zhǔn)備區(qū)）

參考所購(gòu)買的商用基因組 DNA 提取試劑盒說明書進(jìn)行操作。

c) 加樣（樣本準(zhǔn)備區(qū)）

將待測(cè)樣本的基因組 DNA、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照分別加入已裝有 3 種反應(yīng)液的 PCR 反應(yīng)管，加入量為 5μl/

孔。

2. PCR 擴(kuò)增

將準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)板或反應(yīng)管放置在儀器樣本槽相應(yīng)位置，并記錄放置順序。按表3設(shè)置儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)：

表3：儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)

		步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)

	1	預(yù)變性	95℃	5 min	1 cycle

	2	變性	95℃	10 s	40
					40

	3	退火、延伸及檢測(cè)熒光	60℃	45 s	cycles

		步驟 3 收集熒光信號(hào)，檢測(cè)通道：FAM、VIC、ROX

*注：passive reference 和 quencher處均選擇“none”。