人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯免疫吸附測定試劑盒規格:96T/48T,本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的待測物質抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質,再與HRP標記的待測物質抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關。
人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯免疫吸附測定試劑盒儲存方式:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯免疫吸附測定試劑盒包含:
1.酶標儀(450nm檢測波長濾光片,570nm或630nm校正波長濾光片) 。
2.洗板機(可調注液量,保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出)。
3.超凈工作臺,生物安全柜,通風柜。
4.高精度單道加液器(量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
5.高精度多道加液器(8道或12道,量程為50-300μl).
6.37℃恒溫箱。
7.低溫離心機。
8.電冰箱(4℃,-20℃,-86℃).
人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯免疫吸附測定試劑盒標本要求:
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯免疫吸附測定試劑盒操作步驟:
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。