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本產品僅供科學實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

細胞簡介：

小鼠小氣道平滑肌分離自小氣道組織；臨床上通常將內徑小于2mm的小細支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小，但易阻塞的特點。在平靜吸氣時，空氣進入狹窄的鼻咽部，產生渦流。由于小氣道已無軟骨支持，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后，管腔通暢性不象軟骨性氣道，易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細胞形成連續呼吸道內層，作為隔絕外界有害物質的物理和功能屏障發揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處，這些細胞在功能上能夠調節免疫反應、產生化學因子進行宿主防御、表達粘附分子，并可能通過HLA-DR表達呈遞抗原；它們還能產生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病，如哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化，都涉及呼吸道表面上皮細胞的破壞；小氣道上皮細胞的培養可為防止呼吸道擴增疾病和重塑提供新的治療選擇。小氣道平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。小氣道的生理功能特點：①小氣道阻力小；②氣流速度慢；③可調節控制通氣與血流比例。小氣管平滑肌細胞主要功能：①保持氣道張力維持小氣道形態；②肺小氣道進行氣體交換，病變可引起換氣功能障礙；③炎癥、痰液阻塞或當氣道外壓大于氣道內壓時容易造成小氣道閉合、萎陷。小氣管平滑肌細胞與主要病生理變化：①支氣管炎；②肺氣腫；③慢性阻塞性肺疾病。

原代細胞培養條件：

?溫度?：通常在37℃下進行，以模擬體內溫度。

?pH值?：培養液的pH值應保持在7.2~7.4之間，以維持細胞的正常生理狀態。

?氣體環境?：在含有5% CO2的培養箱中進行，以促進細胞生長。

?培養基?：使用含有適當營養成分的培養基，如Eagle's MEM、DMEM等。

?無菌操作?：整個培養過程需要在無菌條件下進行，以防止污染。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠小氣道平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

實驗室分離的小鼠小氣道平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養信息：

培養基：基礎培養基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞培養的具體操作步驟如下：

?組織處理?：將動物組織從機體中取出，剪碎后用等消化酶處理，使其分散成單個細胞。

?細胞計數?：使用血細胞計數器或其他方法對細胞進行計數，確保細胞密度適中。

?接種培養?：將細胞懸液接種到培養瓶中，加入適量的培養基，置于37℃、5% CO2的培養箱中培養。

?換液和傳代?：定期更換培養液，當細胞達到一定密度時進行傳代培養，以維持細胞的生長狀態。

原代細胞的4種培養方法：

　　① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用

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