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本產品僅供科學實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

細胞簡介：

小鼠退行性椎間盤髓核細胞分離退行性椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，分為中央部的髓核，富于彈性的膠狀物質；周圍部的纖維環，由多層纖維軟骨環按同心圓排列。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位于髓核的四周。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結構的一部分，位于兩軟骨板與纖維環之間。由縱橫交錯的纖維網狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質構成的彈性膠凍物質。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生時體積大而松散，位于椎間盤的中央，至成年時位置移至椎間盤的中后部；在成年以前構成髓核的主要物質是大量蛋白多糖復合體、膠原纖維和纖維軟骨，隨著年齡的增長，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。

原代細胞培養條件：

?溫度?：通常在37℃下進行，以模擬體內溫度。

?pH值?：培養液的pH值應保持在7.2~7.4之間，以維持細胞的正常生理狀態。

?氣體環境?：在含有5% CO2的培養箱中進行，以促進細胞生長。

?培養基?：使用含有適當營養成分的培養基，如Eagle's MEM、DMEM等。

?無菌操作?：整個培養過程需要在無菌條件下進行，以防止污染。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠退行性椎間盤髓核經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

實驗室分離的小鼠退行性椎間盤髓核采用膠原酶-混合消化法并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養信息：

培養基：基礎培養基，含FBS、EGF、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：梭形、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞培養的具體操作步驟如下：

?組織處理?：將動物組織從機體中取出，剪碎后用等消化酶處理，使其分散成單個細胞。

?細胞計數?：使用血細胞計數器或其他方法對細胞進行計數，確保細胞密度適中。

?接種培養?：將細胞懸液接種到培養瓶中，加入適量的培養基，置于37℃、5% CO2的培養箱中培養。

?換液和傳代?：定期更換培養液，當細胞達到一定密度時進行傳代培養，以維持細胞的生長狀態。

原代細胞的4種培養方法：

　　① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用

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