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原代細(xì)胞培養(yǎng)條件：

?溫度?：通常在37℃下進(jìn)行，以模擬體內(nèi)溫度。

?pH值?：培養(yǎng)液的pH值應(yīng)保持在7.2~7.4之間，以維持細(xì)胞的正常生理狀態(tài)。

?氣體環(huán)境?：在含有5% CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，以促進(jìn)細(xì)胞生長。

?培養(yǎng)基?：使用含有適當(dāng)營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，如Eagle's MEM、DMEM等。

?無菌操作?：整個培養(yǎng)過程需要在無菌條件下進(jìn)行，以防止污染。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

細(xì)胞簡介：

小鼠冠狀動脈成纖維分離自冠狀動脈組織；冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動脈的分布分為三型：右優(yōu)勢型、均衡型、左優(yōu)勢型。左右冠狀動脈是升主動脈的對分支。左冠狀動脈為一短干，發(fā)自左主動脈竇，經(jīng)肺動脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。它是構(gòu)成冠狀動脈壁的主要細(xì)胞成分，細(xì)胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性Na+通道、多種Ca2+通道和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細(xì)胞膜電位的復(fù)極化、超極化，調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動脈粥樣硬化的發(fā)展也涉及冠狀動脈平滑肌細(xì)胞增殖、炎癥及凋亡等。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠冠狀動脈成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的小鼠冠狀動脈成纖維采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體操作步驟如下：

?組織處理?：將動物組織從機(jī)體中取出，剪碎后用等消化酶處理，使其分散成單個細(xì)胞。

?細(xì)胞計數(shù)?：使用血細(xì)胞計數(shù)器或其他方法對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，確保細(xì)胞密度適中。

?接種培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種到培養(yǎng)瓶中，加入適量的培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?換液和傳代?：定期更換培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定密度時進(jìn)行傳代培養(yǎng)，以維持細(xì)胞的生長狀態(tài)。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat coagulation factor XIII (F x) ELISA Kit 大鼠Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒

HumanGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 人糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanbacterialvaginosis,BVELISA試劑盒人細(xì)菌(BV)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物蔗糖0酸合成酶(sucrosephosphatesyhase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Huma-Hglycoprotein,THPELISAKit人TH糖蛋白(THP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒 ，英文名： TLR3 ELISA Kit

Mouse eighth factor related aigen (F VIII Ag) ELISA Kit 小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒

ELISA 小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a(mouse SDF-1a) 48T/96 進(jìn)口分裝

CLIAKitforIGF-1ELISAKit大鼠胰島素樣生長因子1規(guī)格：48T/96

通用型蘋果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitPeosidine大鼠戊糖素規(guī)格：48T/96

TFRC重組食蟹猴 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29 0.5mgintegrin Beta1(ITG- Beta1/CD29) 粘附分子整合素β1抗原

MICA重組人 MICA 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FHIT Protein Human 重組人 Fragile histidine triad / FHIT 蛋白 (His 標(biāo)簽)

SIRPA Protein Mouse 重組小鼠 SIRP alpha / CD172a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

小鼠冠狀動脈成纖維細(xì)胞integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29 0.5mgintegrin Beta1(ITG- Beta1/CD29) 粘附分子整合素β1抗原

FHIT Protein Human 重組人 Fragile histidine triad / FHIT 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TFRC重組食蟹猴 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

SIRPA Protein Mouse 重組小鼠 SIRP alpha / CD172a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MICA重組人 MICA 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

原代細(xì)胞的4種培養(yǎng)方法：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　　③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　　④器官培養(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用