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上海莼試生物技術有限公司
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型號
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其他品牌 -
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所在地
上海市
更新時間：2024-09-30 13:31:05瀏覽次數：86
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原代細胞培養的具體步驟：
1、準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。
3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。
5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。
7、計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。
8、培養：置于37℃溫箱培養，如用CO2溫箱培養，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。
商品屬性：
組織來源 | 椎間盤組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
產品貨號 | CS-X3152 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞簡介：
大鼠終板軟骨分離自椎間盤終板軟骨組織；椎體終板是椎體在生長發育過程中，椎體上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈輕度凹陷，即為骨性終板。椎體終板的中央仍為一薄層透明軟骨覆蓋，并終生存在，即為軟骨終板，上下軟骨終板與髓核和纖維環連接共同構成椎間盤。椎體終板構成了椎間盤的上下邊界，位于椎體中心的松質骨和椎間盤之間。是由軟骨下骨和厚度相當的覆蓋其上的軟骨組成。主要作用是防止椎間盤髓核組織嵌入椎體，同時具有平衡分散應力的作用。成熟的終板軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內，這些終板軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，終板軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，終板軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的終板軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠終板軟骨經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
質量檢測：
公司實驗室分離的大鼠終板軟骨采用膠原酶-蛋白酶聯合消化并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
培養信息：
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細胞VS細胞系：
用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養的第一代到第十代以內的細胞統稱為原代細胞。
原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數的細胞能夠度過“危機"而繼續傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質發生了改變且帶有癌變的特點，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。
也有認為細胞系指原代細胞培養物經傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續傳代的培養細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。
細胞系具有容易培養、種類多、價格便宜、無限傳代等優點，也非常容易在培養、凍存中發生錯誤鑒定及交叉污染的問題。
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