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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠氣管平滑肌細胞

商品屬性：

大鼠氣管平滑肌分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管平滑肌是氣管的重要結構組成之一，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用；能夠保持氣道張力，維持氣道管狀形態(tài)，從而有利于氣體流通，保持肺部通氣。氣管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。氣管平滑肌細胞的異常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是氣道重塑的關鍵。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

豬免疫球蛋白E(IgE)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human anapastic lymphoma kinase (ALK) ELISA Kit 人間變性淋巴瘤激酶(ALK)ELISA試劑盒

PorcinelisteriolysinELISAKit 豬單核細胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAMPKELISAKit魚0酸化腺苷酸活化蛋白激酶規(guī)格：48T/96T

血液胱(cystine)含量比色法定量檢測試劑盒20次

PorcineAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬抗受體(A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒 ，英文名： IFI16/p16 ELISA Kit

Rabbit soluble E selectin (sE-selectin) ELISA Kit 兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒

ELISA 小鼠巨嗜細胞炎性蛋白-2(mouse MIP-2) 48T/96T 進口分裝

CLIAKitforIL1Ra(MouseIerleukin1receptoraagonist)ELISAkit小鼠白介素1受體拮抗劑規(guī)格：48T/96T

通用型賴(lysine)含量化學比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitNO大鼠血清規(guī)格：48T/96T

HDAC4重組人 HDAC4 蛋白 (aa 612-1084) Protein

SLC34A2/NaPi-2b(Solute carrier family 34 member 2 0.5mgSLC34A2/NaPi-2b(Solute carrier family 34 member 2) 0酸協(xié)同轉運蛋白抗原

AGO1重組人 AGO1 / Argonaute 1 / EIF2C1 蛋白 (His 標簽) Protein

ARF1 Protein Human 重組人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 (His 標簽)

MERTK Protein Human 重組人 MERTK / Mer 蛋白 (His & Fc 標簽)

大鼠氣管平滑肌細胞SLC34A2/NaPi-2b(Solute carrier family 34 member 2 0.5mgSLC34A2/NaPi-2b(Solute carrier family 34 member 2) 0酸協(xié)同轉運蛋白抗原

ARF1 Protein Human 重組人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 (His 標簽)

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AGO1重組人 AGO1 / Argonaute 1 / EIF2C1 蛋白 (His 標簽) Protein