上海莼試生物技術有限公司
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參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質 經銷商
- 所在地 上海市
更新時間:2022-03-30 10:41:24瀏覽次數:199
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參數規格:
產品名稱:對蝦黃頭病病毒(YHV)定性PCR檢測試劑盒
產品貨號:CP100146
產品規格:50T
產品分類:RT-PCR法
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
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二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
平菇胰輔脂酶抗體Human HCCS(Holocytochrome C Synthase) ELISA Kit人羥甲基戊二酸單酰還原酶(HMG-CoAR)免疫試劑盒
螺卷毛殼19號染色體開放閱讀框45抗體Human HDAC2(Histone Deacetylase 2) ELISA Kit人羥甲基戊二酸單酰(HMG-CoA)免疫試劑盒
鮮綠青霉過氧化氫誘導轉錄蛋白1抗體Human GSTα4(Glutathione S Transferase Alpha 4) ELISA Kit人羥基賴正己氨酸(HLNL)免疫試劑盒
釀酒酵母核因子NFκB激活蛋白1抗體Human Hepc(Hepcidin) ELISA Kit人羥(Hyp)免疫試劑盒
米曲霉第12號染色體開放閱讀框23抗體Human GSK3α(Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha) ELISA Kit人強啡肽(Dyn)免疫試劑盒
釀酒酵母γ-連環素/連接蛋白γ抗體Human GSP(Glycosylated Serum Protein) ELISA Kit人潛伏轉化生長因子β結合蛋白2(LTBP2)免疫試劑盒
日勾維腸桿菌10號染色體開放閱讀框4抗體Human GSTα1(Glutathione S Transferase Alpha 1) ELISA Kit人潛伏膜蛋白1(LMP-1)免疫試劑盒
中國克魯維酵母10號染色體開放閱讀框47抗體Human GPI(Glucose 6 Phosphate Isomerase) ELISA Kit人前心鈉肽(Pro-ANP)免疫試劑盒
黃色短桿菌10號染色體開放閱讀框81抗體Human GPR120(G Protein Coupled Receptor 120) ELISA Kit人前纖維蛋白1抗體免疫試劑盒
猴頭菌19號染色體開放閱讀框47抗體Human GPRC5A(G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A) ELISA Kit人前纖維蛋白1免疫試劑盒
金黃殼囊孢19號染色體開放閱讀框54抗體Human GPR37(G Protein Coupled Receptor 37) ELISA Kit人前鐵調素(Pro-Hepc)免疫試劑盒
貝雷絲孢酵母N-乙酰半乳糖糖蛋白3、β-半乳糖轉移酶1抗體Human GR(Glutathione Reductase) ELISA Kit人前列腺酸性磷酸酶(PAP)免疫試劑盒
球孢白僵菌19號染色體開放閱讀框18抗體Human GIF(Gastric Intrinsic Factor) ELISA Kit人前列腺素H2(PGH2)免疫試劑盒
總狀毛霉19號染色體開放閱讀框21抗體Human GPR120(G Protein Coupled Receptor 120) ELISA Kit人前列腺素F2α(PGF2α)免疫試劑盒
沼澤紅假單胞菌19號染色體開放閱讀框24抗體Human GLDL(Glycated Low Density Lipoprotein) ELISA Kit人前列腺素F(PGF)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體Human GJβ1(Gap Junction Protein Beta 1) ELISA Kit人前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒
對蝦黃頭病病毒(YHV)定性PCR檢測試劑盒: 共頭霉 質量規格:HPLC≥98%,標準品干擾素調節因子8試劑盒四甲基姜黃素
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質量規格:GC≥98%,BR干擾素調節因子3試劑盒去氫延胡索甲素硝酸鹽
木耳Auricularia│auricula (Hook. f.) Underw. 質量規格:HPLC≥98%,標準品干擾素a-抗體試劑盒肌氨酸
短乳桿菌Lactobacillus│brevis 質量規格:>99%,BR鈣轉運ATP酶2C型成員1試劑盒二氫兩面針堿
枯草芽胞桿菌枯草亞種Bacillus subtilis subsp. subtilis 質量規格:HPLC>99%,標準品鈣粘蛋白相關的神經受體1試劑盒四氫表小檗堿
溝鞭藻玫瑰桿菌Dinoroseobacter│sp. 質量規格:HPLC≥95%,標準品鈣依賴性胞漿型磷脂酶A2試劑盒環氧前胡
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。