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操作流程如下：

（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

（2）酶標板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

我司提供免費代測服務，凡購買我司試劑盒的用戶，只收取試劑盒的費用,其他輔助試劑全部免費。我們將根據實驗工作量和難易程度，雙方協定實驗周期，保質保量完成委托實驗，并將實驗結果和材料用特快專遞免費寄送到您手中。

從標本收集、保存、預試驗、實驗、數據分析等全實驗過程提供完整的技術指導。

公司采用的全是進口原材料研，發靈敏性高，高效性，吸附均勻、吸附性好，回收利用率高、可靠性強，無效包退包換，公司提供免費代測服務，各種種屬ELISA試劑盒產品齊全，質量可靠。

實驗室注意事項：

1、所有試劑不能與皮膚直接接觸。

2、務必使用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不準用同一種工具同時連續取用多種試劑。

3、取完一種試劑后，應將工具洗凈、擦干后，方可取用另一種試劑。

4、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后將瓶放回原處。

5、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內。

實驗標準品圖：

40 ng/L，5號標準品，150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

20 ng/L，4號標準品，150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

10 ng/L，3號標準品，150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

5 ng/L，2號標準品，150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.5 ng/L，1號標準品，150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

標本的采集與保存：

1、血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2 小時或4oC 過夜，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即

可，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30 分鐘內于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，

取上清即可檢測，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

3、組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行（有條件實驗室可選用機器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融進一步處理（超聲破碎過

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關，我司嚴格按照國家標準進行，已獲得國家承認的“三證"，每一個產品都有對應的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。

二、樣本

1.內源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測抗原時，可用加入到標本稀釋液中使RF降解；

補體的控制方法：

①用EDTA稀釋標本；

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；

2.外源性干擾因素：包括標本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等；

控制方法：采血時規范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標本時采用無菌試管，經檢測后再低溫凍存；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標本；對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

21號染色體開放閱讀框62抗體Human VACM-1(Cullin 5) ELISA KitFMOC-D-

化胞漿型磷脂A2抗體Human TSC2(Tuberous Sclerosis Protein 2) ELISA Kit2′-甲氧基尿苷

9號染色體開放閱讀框46抗體Human Rbx2(RNF7) ELISA Kit天青II曙紅

20號染色體開放閱讀框103抗體Human CD72(B-cell differentiation antigen) ELISA Kit葡聚糖凝膠S-100 HR

9號染色體開放閱讀框86抗體Human anti 21-OH Ab(anti 21-hydroxylase antibody) ELISA Kit葡聚糖T10

鈣粘附分子18抗體Human Asprosin ELISA Kit人促睡眠肽（DSIP）ELISA試劑盒,DSIP ELISA kit

CD276抗體Human 8-iso-PGF2α(8-isoprostane) ELISA Kit人基質金屬蛋白抑制因子3（TIMP-3）ELISA試劑盒,TIMP-3 ELISA kit

21號染色體開放閱讀框25抗體Human anti-EPO antibody(anti-Erythropoietin antibody) ELISA Kit人抗核仁抗體（ANA）ELISA試劑盒, ANA ELISA kit

PP13胎盤蛋白13酶聯免疫試劑盒雙脒標準溶液 10μg/ml,u=4%Anti-TPO/FITC  熒光素標記兔抗狀腺過氧化物抗體IgG豬周期素依賴性激抑制因子2A(CDKN2A)聯免疫吸附測定試劑盒

四唑嘧磺隆 分析標準品，99.5%Anti-TRA16/FITC  熒光素標記激素受體相關蛋白16抗體IgG豬緊密結合蛋白1(TJP1)聯免疫吸附測定試劑盒

標準溶液 100μg/ml,u=4%（劇品）Anti-TRA16 /FITC  熒光素標記激素受體相關蛋白/孤兒素受體相關蛋白抗體IgG豬胸腺質淋巴生成素(TSLP)聯免疫吸附測定試劑盒

標準溶液 10μg/ml,u=5%（劇品）Anti-TRADD/FITC  熒光素標記有死亡區的腫瘤壞死因子受體1相關蛋白抗體IgG豬核糖體蛋白L26(RPL26)聯免疫吸附測定試劑盒

酰嘧磺隆 分析標準品，93%Anti-TP I /FITC  熒光素標記拓普西異構Ⅰ抗體IgG豬絲狀血球凝集素(FHA)聯免疫吸附測定試劑盒

莠滅凈 分析標準品，98.8%Anti-TRAF1/Biotin   化腫瘤壞死因子受體相關因子1抗體豬谷氨脫羧2(GAD2)聯免疫吸附測定試劑盒

唑嘧磺草 分析標準品,98%Anti-TRAF1/FITC  熒光素標記腫瘤壞死因子受體相關因子1抗體IgG豬凋亡相關因子配體(FASL/TNFSF6)聯免疫吸附測定試劑盒

標準溶液 100μg/ml,u=4%Anti-TRAF2/TNF-R2 /FITC  熒光素標記腫瘤壞死因子受體相關因子2抗體IgG豬腎素(REN)聯免疫吸附測定試劑盒

標準溶液 10μg/ml,u=6%Anti-TRAF3/CD40bp /FITC  熒光素標記CD40結合蛋白/CD40受體相關因子1抗體IgG豬抗肌動蛋白抗體(AAA)聯免疫吸附測定試劑盒

γ-六六六標準溶液 100μg/ml,u=3%Anti-TRAF6 /FITC  熒光素標記腫瘤壞死因子受體相關因子6抗體IgG豬早期生長應答蛋白2(EGR2)聯免疫吸附測定試劑盒

γ-六六六標準溶液 10μg/ml,u=5%Anti-TP-1/TEP1/FITC  熒光素標記端粒相關蛋白1抗體IgG豬血管內皮生長因子B(VEGF-B)聯免疫吸附測定試劑盒

聯菊酯 分析標準品，99%Anti-TP II A/TOP2a/FITC  熒光素標記DNA拓普西異構ⅡA抗體IgG豬S轉移θ2(GSTθ2/GSTt2)聯免疫吸附測定試劑盒

聯菊酯標準溶液 100μg/ml,u=3%，體：石油Anti-TRAIL/Apo2L /FITC  熒光素標記腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體/凋亡素2配體抗體IgG豬紅補體受體1 (CR1)聯免疫吸附測定試劑盒

聯菊酯標準溶液 10μg/ml,u=7%，體：石油Anti-Transthyretin /FITC  熒光素標記轉狀腺素蛋白抗體IgG豬肌球蛋白重鏈10(MYH10)聯免疫吸附測定試劑盒

芐嘧磺隆標準溶液 100μg/ml,u=3Anti-TREM1/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠髓系觸發受體1抗體IgG豬S轉移κ1(GSTκ1)聯免疫吸附測定試劑盒